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主题：RF-5301荧光分光光度计浓度如何确定？

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xueer_08
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发表于：2012/02/29 13:58:13 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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用RF-5301荧光分光光度计扫描药物与DNA作用后的图谱，药物与DNA分别的浓度如何确定，是不是两者要在同一个数量级的。
根据查找到的文献，说药物的浓度与做紫外时的浓度差不多，可以再低一个数量级。但是我做紫外时药物的浓度为
4×10－5mol/l，而拿去做荧光的时候，荧光强度达到2000多，稀释3000倍后，荧光强度大150左右，这是为什么呢？这样正常吗。如果拿稀释3000倍后的药物去做紫外已经扫不出谱图了。这种现象正常吗？
DNA几乎没有荧光，是不是就是说DNA的浓度为多少都可以呢？
在药物里滴加DNA后，荧光强度增强，稍有蓝移，当药物与DNA比为1：2时，强度降低。
但是我找到的文献都是在药物里滴加DNA后，荧光强度减弱，红移。谁能帮我分析下？
所用的紫外为PE Lambda35
推荐答案：notell回复于2012/03/02
用RF-5301荧光分光光度计扫描药物与DNA作用后的图谱，药物与DNA分别的浓度如何确定，是不是两者要在同一个数量级的。
根据查找到的文献，说药物的浓度与做紫外时的浓度差不多，可以再低一个数量级。但是我做紫外时药物的浓度为
4×10－5mol/l，而拿去做荧光的时候，荧光强度达到2000多，稀释3000倍后，荧光强度大150左右，这是为什么呢？这样正常吗。如果拿稀释3000倍后的药物去做紫外已经扫不出谱图了。这种现象正常吗？
DNA几乎没有荧光，是不是就是说DNA的浓度为多少都可以呢？
在药物里滴加DNA后，荧光强度增强，稍有蓝移，当药物与DNA比为1：2时，强度降低。
但是我找到的文献都是在药物里滴加DNA后，荧光强度减弱，红移。谁能帮我分析下？
所用的紫外为PE Lambda35

荧光检测极限要比紫外高2-3个数量级，再者紫外测的是吸收，而荧光测的是发射光谱，接收器也不同，所以二者浓度很可能需要不同的浓度。理论上说如果接受器的响应可以无限大，是没有问题的，但荧光的接收器是光电倍增管，灵敏度很高，很容易就溢出了，就无法测量了。
由于一般情况下荧光接收器的灵敏度比较高，对于荧光太强的溶液可以采取稀释或者减少样品量的方法。
至于说加DNA荧光增强，可以考虑是否药品浓度太大，吸收了部分荧光，随着DNA添加相当于药品稀释，荧光逐渐增强。达到一定的浓度后，随着DNA添加，又逐渐下降。
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2012/2/29 19:51:18 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
首先楼主的这篇帖子应该发到分子荧光版面。其次荧光方法原本就比紫外可见方法的灵敏度要高。两种方法的样品浓度不在同一个数量级上。
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tutm
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2012/3/1 18:29:22 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
你的第一个现象应该没什么不正常，两种仪器测试原理不同，荧光法灵敏度高1-3个数量级是可能的。

第二个问题，你加入DNA后，溶液的pH有没有变化？这可能会有明显影响的。
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notell
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2012/3/2 14:21:54 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
用RF-5301荧光分光光度计扫描药物与DNA作用后的图谱，药物与DNA分别的浓度如何确定，是不是两者要在同一个数量级的。
根据查找到的文献，说药物的浓度与做紫外时的浓度差不多，可以再低一个数量级。但是我做紫外时药物的浓度为
4×10－5mol/l，而拿去做荧光的时候，荧光强度达到2000多，稀释3000倍后，荧光强度大150左右，这是为什么呢？这样正常吗。如果拿稀释3000倍后的药物去做紫外已经扫不出谱图了。这种现象正常吗？
DNA几乎没有荧光，是不是就是说DNA的浓度为多少都可以呢？
在药物里滴加DNA后，荧光强度增强，稍有蓝移，当药物与DNA比为1：2时，强度降低。
但是我找到的文献都是在药物里滴加DNA后，荧光强度减弱，红移。谁能帮我分析下？
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荧光检测极限要比紫外高2-3个数量级，再者紫外测的是吸收，而荧光测的是发射光谱，接收器也不同，所以二者浓度很可能需要不同的浓度。理论上说如果接受器的响应可以无限大，是没有问题的，但荧光的接收器是光电倍增管，灵敏度很高，很容易就溢出了，就无法测量了。
由于一般情况下荧光接收器的灵敏度比较高，对于荧光太强的溶液可以采取稀释或者减少样品量的方法。
至于说加DNA荧光增强，可以考虑是否药品浓度太大，吸收了部分荧光，随着DNA添加相当于药品稀释，荧光逐渐增强。达到一定的浓度后，随着DNA添加，又逐渐下降。
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mengzhaocheng
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2012/3/2 23:54:05 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 notell(notell) 发表:
用RF-5301荧光分光光度计扫描药物与DNA作用后的图谱，药物与DNA分别的浓度如何确定，是不是两者要在同一个数量级的。
根据查找到的文献，说药物的浓度与做紫外时的浓度差不多，可以再低一个数量级。但是我做紫外时药物的浓度为
4×10－5mol/l，而拿去做荧光的时候，荧光强度达到2000多，稀释3000倍后，荧光强度大150左右，这是为什么呢？这样正常吗。如果拿稀释3000倍后的药物去做紫外已经扫不出谱图了。这种现象正常吗？
DNA几乎没有荧光，是不是就是说DNA的浓度为多少都可以呢？
在药物里滴加DNA后，荧光强度增强，稍有蓝移，当药物与DNA比为1：2时，强度降低。
但是我找到的文献都是在药物里滴加DNA后，荧光强度减弱，红移。谁能帮我分析下？
所用的紫外为PE Lambda35

荧光检测极限要比紫外高2-3个数量级，再者紫外测的是吸收，而荧光测的是发射光谱，接收器也不同，所以二者浓度很可能需要不同的浓度。理论上说如果接受器的响应可以无限大，是没有问题的，但荧光的接收器是光电倍增管，灵敏度很高，很容易就溢出了，就无法测量了。
由于一般情况下荧光接收器的灵敏度比较高，对于荧光太强的溶液可以采取稀释或者减少样品量的方法。
至于说加DNA荧光增强，可以考虑是否药品浓度太大，吸收了部分荧光，随着DNA添加相当于药品稀释，荧光逐渐增强。达到一定的浓度后，随着DNA添加，又逐渐下降。


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