图5-1的微粒类型(图示大致为所用微粒的相对大小)。
表5-2 分析柱的理想的微粒特性
特性 | 用途 |
5μm全多孔微粒 | 大多数分离 |
3μm全多孔微粒 | 快速分离 |
1.5μm薄壳微粒 | 极快速分离(尤其是大分子) |
±50%(均值的)粒径分布 | 稳定、重现、高柱效、柱压低 |
7~12nm孔径,150~400m2/g(小孔) | 小分子分离 |
15~100nm孔径,10~150m2/g(小孔) | 大分子分离 |
表5-2 一些C18色谱柱硅胶担体的物理性质
色谱柱 | 孔直径(nm) | 表面积(m2/g) | 体积孔隙率% (ml/ ml) |
Hypersil ODS | 12 | 170 | 57 |
LiChrosorb C18 | 10 | 355 | 71 |
Novapak C18 | 6 | —— | —— |
Nucleosil C18 | 10 | 350 | 69 |
Symmetry C18 | 10 | 335 | 66 |
Zorbax ODS | 6 | 300 | 5 |
Zorbax Rx,SB,XDB | 8 | 180 | 50 |
略
表5-3用ICP-AES/MS法分析Zorbax Rx-SIL硅胶的典型微量元素
元素 | 含量a(ppm) |
Na | 10 |
Ca | 2 |
K | <3 |
Al | 1.5 |
Fe | 3 |
Mg | 4 |
Zn | 1 |
图5-4 以A型与B型硅胶担体的色谱柱分离三环抗抑郁药的比较
表5-4推荐用于分离碱性化合物的一些硅胶基质担体与色谱柱
Altima | RSIL |
Betasil | Supelcosil ABZ+ |
DeltaBond | Supersphere RP |
Encapharm RP | Symmetry |
Hypersil –DBS | Synchropak RP-SCD |
Inertsil | Techspere-BDS |
Kromasil | Vydac |
LiChrospher Select B | YMC-Basic |
Nucleosil AB | Zorbax Rx,SB,XDB |
图5-5 p H11时多孔聚合物柱的色谱图
图5-6 在石墨柱上分离顺-反异构体。
表5-5色谱柱构型(不锈钢)a
类型 | 内径(cm) | 长度(cm) | 粒度(μm) |
分析型 | |||
加压柱头 | 0.3——0.46 | 3——25 | 3——10 |
卡套 | 0.3——0.46 | 7.5,10 | 3——10 |
微球 | 0.1,0.21 | 15,25 | 3——8 |
半制备型 | 0.8——1.0 | 10——25 | 5——20 |
制备型 | 2.0——5.0 | 10——25 | 5——20 |
图5-7 键合相填料的化学反应。
图5-8 C18硅烷键合相的种类
表5-6硅烷键合相链长与体积对硅胶表面覆盖率的影响
键合相 | 表面覆盖率(μmol/ m2) | 反应的硅羟基a(%) |
三甲基 | 4.1 | 51 |
二甲基-3-氰丙基 | 3.6 | 45 |
二甲基-正-丁基 | 3.5 | 44 |
二甲基-正-辛基 | 3.2 | 40 |
二甲基-正-十八烷基 | 2.7 | 34 |
三异丙基 | 2.2 | 28 |
二异丙基-3-氰丙基 | 2.1 | 26 |
二异丙基-正-辛基 | 2.0 | 25 |
二异丙基-正-十八烷基 | 1.9 | 25 |
图5-9 C18 与C8色谱柱的保留值、选择性与峰形。
图5-10 p H2;500C时,硅烷链长度对键合相稳定性的影响。
图5-11 硅烷键合相的Si-O-Si键的水解
图5-12 p H、高温时,硅烷键合相降解
图5-13短链氰基键合相的稳定性比较
图5-14 p H9 时,C18柱的稳定性
图5-15未封尾与封尾C8柱的稳定性比较
表5-7在p H7以上,建立普适性方法的策略
用键合致密(完全反应)的长链烷基固定相(C18 、C8等) 用以硅溶胶工艺制得的硅胶担体(Hypersil、Kromasil、Spherisorb、Zorbax),以减少硅胶担体的降解。 用有机的、枸橼酸与硼酸缓冲液,以减少硅胶担体的溶解(如可能,避免用磷酸盐、胺盐与碳酸盐)。 保持0.01~0.05M的缓冲液浓度。 设定柱温≤400C。 为使色谱柱稳定,用缓冲阳离子Li+>Na+>K+>NH4+。 为使色谱柱稳定,用经封尾的色谱柱。 加碱性流动相改性剂(如三乙胺),以保持良好的长期分离重现性。 |
图5-16 p H10阴离子缓冲液对硅胶担体溶解度的影响