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主题：【求助】日立F-7000检测伏马毒素

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秋月芙蓉

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发表于：2012/05/30 21:19:36 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

以下是xcm-105051版友给我的站短，希望大家一起来帮忙，谢谢！

您好，我现在正在用日立的F-7000来检测伏马毒素，伏马毒素本身没有荧光，用OPA试剂衍生后再来测，但衍生后的化合物不稳定，荧光会随着时间衰减。
伏马毒素是溶于乙腈：水=1：1的溶液中的。所以我配制了一系列浓度的伏马毒素标准溶液，空白是乙腈水（因为空白与OPA试剂衍生后也有荧光，但低于系列浓度的伏马毒素衍生后的荧光值）。然后对分别空白和系列浓度的伏马毒素衍生后进行时间扫描。分别计算前30S的荧光平均值，再绘制标准曲线。
问题是每次的的标准曲线结果都比较好（相关系数能到0.99以上，），但是每天和每天测的荧光值有一定差别，就是曲线方程不一样。
这是因为是有系统误差呢？还是荧光受条件因素较多，所以每次的都不一样呢？
还有就是我应该怎样来调零和扣除空白呢？

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2012/5/30 22:11:30 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

荧光受环境温度影响比较大的，不必追求每天的强度一致，反正定量也是要求每天做曲线的。

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xcm-105051

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2012/5/31 10:05:15 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 悠旸(ihqs) 发表:
荧光受环境温度影每响比较大的，不必追求每天的强度一致，反正定量也是要求每天做曲线的。

2
是的，我现在测的时候，是在室温下。我每天下午测，每天和每天不一样，有的时候差别挺大的，温度的影响有这么大吗？
还有，荧光定量的话，是要每次测样品时都建一条标曲吗？

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sunny04141125

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2012/5/31 11:16:54 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

有些物质属于光敏物质，光照会对样品的荧光信号产生干扰。
举个例子，维生素C本身见光后其有效成分就会慢慢衰减，在应用荧光分光光度计测定其含量（衍生物）的时候，强光会使其荧光信号不稳定，逐渐衰减，且这种现象是不可避免的。
减缓方法，可以先将激发处的快门关闭（选择自动模式），测量的时候快门自动打开，不测的时候快门关闭从而保证样品荧光信号。
还有就是在操作的过程中尽可能的避光，加快实验的速度。

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悠旸

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2012/6/1 15:21:12 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

是的，每次做样都要做标曲。

原文由 xcm-105051(xcm-105051) 发表:
原文由 悠旸(ihqs) 发表:
荧光受环境温度影每响比较大的，不必追求每天的强度一致，反正定量也是要求每天做曲线的。
2
是的，我现在测的时候，是在室温下。我每天下午测，每天和每天不一样，有的时候差别挺大的，温度的影响有这么大吗？
还有，荧光定量的话，是要每次测样品时都建一条标曲吗？

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