主题:【讨论】高浓度强酸对HLB小柱的保留是否有影响?

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vcningmeng
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碰到个实际的问题,客户买了CNW的,poly-sery HLB小柱,60MG/3ML去做蜗牛里面的土霉素,四环素和金霉素,5%的高氯酸大概20ML去提取,离心,上清液过HLB小柱,三个样品的回收率几乎是零。
实验室重复下来,情况也是一样,初步判断下来,5%的高氯酸强度太大了,PH应该在0.5以下。
查了一些文献,有用5%的高氯酸过HLB柱子的,而且回收率很好,客户因此质疑小柱有问题。
个人觉的如此低的PH值,已经完全破坏了HLB小柱的保留模式,各位老师请帮助解答
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雾非雾
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文献有,该客户试过了吗?如果没有用Waters的HLB小柱试过,不能作为依据的。
vcningmeng
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原文由 雾非雾(mcds) 发表:
文献有,该客户试过了吗?如果没有用Waters的HLB小柱试过,不能作为依据的。

个人判断,如此高的强酸浓度,对于HLB的吸附模式已经完全破坏了。
用10%的KOH调PH到3-4之间,上样,其他条件不变,土霉素,四环素和金霉素的回收率在90%以上。
菜头
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原文由 雾非雾(mcds) 发表:
文献有,该客户试过了吗?如果没有用Waters的HLB小柱试过,不能作为依据的。


对比实验是最好的方法,拿WATERS的HLB也试试就知道了。如果waters的HLB也是回收率不行,就是方法有问题。四环素类在酸碱环境下都容易分解,在强酸下提取不是好办法。一般都是用EDTA的缓冲溶液提取的。
happy爱米粒
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我们用过高氯酸沉淀蛋白,也是过HLB小柱,因为是聚合物基质,所以ph范围较广,应该木有问题的
vcningmeng
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原文由 happy爱米粒(xgy2005) 发表:
我们用过高氯酸沉淀蛋白,也是过HLB小柱,因为是聚合物基质,所以ph范围较广,应该木有问题的

这样啊,您这里用的高氯酸的浓度是多少啊?看来我要用WATERS的HLB做一下对比了
是不是PH值对聚合物柱子的吸附没有影响呢?有哪位专家能从原理上帮我上上课?
菜头
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原文由 vcningmeng(vcningmeng) 发表:
原文由 happy爱米粒(xgy2005) 发表:
我们用过高氯酸沉淀蛋白,也是过HLB小柱,因为是聚合物基质,所以ph范围较广,应该木有问题的

这样啊,您这里用的高氯酸的浓度是多少啊?看来我要用WATERS的HLB做一下对比了
是不是PH值对聚合物柱子的吸附没有影响呢?有哪位专家能从原理上帮我上上课?

你找找waters的HLB的宣传材料,上面有介绍原理的。
PH值会影响起作用的基团的形态,肯定对吸附有影响的。
lwzzyj
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关键是5%高氯酸,这个影响到底有多大,确实应该用OASIS HLB做一下
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