鉴于环境激素的危害有很多，如我们熟知的生殖异常、动物雌性化、致癌致畸。上个月的原创中，有关于环境激素的介绍，这个都是本项目前期调研资料。那么该如何对这类物质进行监测、进而监管成为摆在我们面前的一个难题。

下面我将结合本实验室的分析手段对环境激素的检测进行具体阐述。

1 预浓缩手段

目前的预浓缩手段以索氏抽提和液液萃取为主，当然也有使用固相萃取的，但这些一般用在仪器分析上比较多。当用到生物分析时，由于萃取剂对受试生物的毒性作用，会使结果出现较大偏差。

2 检测手段

从大类上分，目前环境激素的检测手段可以分为仪器法和生物法两大类，两者相辅相成，各有千秋。

2.1 仪器法

仪器法是环境激素测试的传统方法，根据其分子大小、质量、电荷等理化特性来进行检测。随着仪器检测技术的不断提升，环境激素的检测方法也越来越多，包括ICP、HPLC-FL、LC-MS、GC-MS、GC-ECD-MS等等。

从总体上来说，这些仪器几乎可以测试表中所有的70的物质。除了已知的三种有环境激素效应的重金属是使用ICP分析外，其余的物质基本都是采用气相或者（高效）液相进行分离，然后根据物质特性，采用ECD、MS、FL等检测器进行精确定量。相对专一性精确分析是仪器法的优点，同时也是该方法的缺点。特别是对于较大分子的物质，由于LC无法做出谱库，若没有标准物对照，很难定性定量，所以对未知的物质很难做出分析。

同时仪器法的精确指的是对物质分类定量的精确性，但是其测试结果中得不到关于环境激素类物质对生物体综合影响（或者说是毒性）信息。

PS：已证实的67种有机物质中小分子的有机物用GC分离，大分子的用LC分离

2.2 生物法

鉴于仪器法存在的各种缺陷，于是生物法就有了其存在着的意义。虽说其在定量上的精度比不上仪器法的准确，测试结果的精密度相对也较低（可能是由于受试材料的差异性），但很多生物法却能很好地给出环境激素对生物体影响效应的指导信息，这对于评估化合物或者受试样品的危害性有着十分重要的意义（我们最关心的不应该是某个物质多少浓度，而是对我们是不是有影响。如果没啥影响，高了低了也可以放任不管）。

目前常用的测试环境激素的生物方法有形态学检测法、卵黄蛋白原(VTG)检测法、酶联免疫法、重组基因酵母法、子宫增重试验、受体竞争试验、内源基因表达法等。下面介绍几种较为常用、也相对简单的方法，以及使用生物法测试环境激素的常用设备。

2.2.1 形态学检测法

形态学检测法中最常用的是日本青鳉。青鳉有伴性的体色基因r，利用其等位基因可制出通过体色差异区别雌雄的系统，能靠体色分清遗传的雌雄。故而可以通过低剂量胚胎染毒试验，方便地分析雌雄比，可以确定受试样品是否具有雌激素效应。这个方法是最经济的，如果自己培养标准鱼种的话，这个实验基本不花什么钱。

2.2.2 卵黄蛋白原(VTG)检测法

卵黄蛋白原(VTG)检测法是目前使用较多的一种方法，目前有鲫鱼、鲤鱼、蝶蛹金小蜂、小龙虾卵黄蛋白原等多个种类的试剂盒可供选择。由于ELISA只能检测到有免疫反应性的细胞因子蛋白的含量，而这并不能完全代表细胞因子的生物活性的水平，所以也有一定缺陷。此外这些试剂盒目前的价格还较高，如果买成品的话批量试验费用较高。

2.2.3 EROD酶联免疫法

上图为EROD酶联免疫法的原理图，在我的记忆中是测二噁英的，而用的材料是鼠肝癌细胞。不过貌似这个细胞不是很好培养。上次在中科院生态中心做的时候貌似也没有培养到最佳状态。总体评价下，实验材料不贵，但这实验不好做；而且测试的是二噁英——环境激素中最毒的一个，不是环境激素总体效应。

2.2.4 重组基因酵母法

方法不多说了，不明白的可以看我前一个原创http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20120801/4173669/。重组基因酵母法有点小贵。我在测试过程中出现过几次莫名假阴性，至今没完全证实原因。高手一起分析下。

3 小结和展望

仪器法和生物法对于环境激素类物质的分析测试相辅相成，生物法适合对样品是否受到环境激素污染进行定性，且能给出样品对生物影响的信息。而仪器法则适合在生物法给出环境激素污染的前提下，对环境激素种类进行鉴定，确定主要污染物，进而对污染进行源解析。

鉴于生物法测试结果检出限较高，且很多预处理方法不完全适用的现象，可以使用生物对样品进行富集浓缩采集（不知是否可行，纯属个人想法）。

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