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液相色谱（LC）

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主题：【求助】血清样品的前处理：甲醇高速离心？

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hiyvon

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发表于：2012/09/20 11:48:11 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

之前发过一篇帖子，说柱效降低，有老师说是因为血清用了甲醇提取，对柱效影响很大。
究竟血清样品用甲醇高速冷冻离心提取，可不可行呢？
我现在也在试其他液液萃取法，实在太麻烦了。

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2012/9/20 14:18:34 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

可以使用固相萃取试试的。血样不管怎么提取，对柱效的损害都还是比普通分析大。

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dark_wzy

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2012/9/21 22:34:22 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

其实样品前处理的选择是根据实验目的来的。如果你做的是有目标的分析，比如说血中某些特定药物成分的检测，就可以选择对于这些药物具有特异选择性的提取溶剂进行提取，不仅可以保证目标化合物的回收率，还可以减少基质和其他化合物的干扰。但是，如果做的是代谢组学等没有目标的研究，则需要选用一种通用性的前处理方法，甲醇沉淀蛋白后离心是一种非常经典的方法。至于说到该方法会导致柱效下降，其实也不尽然。之前我也一直采用这种方法，13000rpm离心15min，上清液进样，一根柱子用几千针是不成问题的。

该帖子作者被版主 zhaohua8011加 2积分， 2经验，加分理由：通常都是这样处理

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hiyvon

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2012/9/22 11:16:10 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

我是测定血药浓度。10000rpm离心5分钟，上清液进样。1个月后。理论塔板数只有原来的一半了，峰高也明显下降了。

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秋醉虞阳

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2012/9/23 21:05:28 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

有水老师的血清固相萃取可以试下。不过如果是医院成本就会提高

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hiyvon

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2012/9/24 10:59:04 地板管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

用二氯甲烷萃取和甲醇高速离心（13000r/min，15min）做了对比。
二氯甲烷提取法的杂质峰信号值明显降低，10+mv左右，被测物20+mv，但在较长的时间段里都有杂峰，分析时间需60分钟；
甲醇高速离心法的杂质峰信号很强，400+mv，而被测物20+mv，但是12分钟后基本没有杂质了。
杂质峰与被测物保留时间都分得开，但是甲醇法我怕杂质对柱子影响太大；但是二氯甲烷法时间实在太长了！

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