主题:求助:氨基酸测序

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xin-8205
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我纯化得到的一种蛋白必须要用银染才能看到条带,如果我要测出这种蛋白的氨基酸顺序,该怎么办,恳求各位专家给点意见!
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我们可以做43种氨基酸的含量测定,采用质谱技术,精确度和重复性都有很好的保证,和传统的毛细管电泳法、HPLC法、氨基酸分析仪比较,无论是从精度上、还是检测的范围上和检测结果的准确度上都有了很大的提高和改善。如果需要可以联系。公司的网站:www.aalabs.com.cn(北京艾米诺医学研究有限公司),我电话:13650196760。公司网站有详细信息和报告样式可浏览。

检测氨基酸的种类有:
必须氨基酸:
精氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸(蛋氨酸)、苯丙氨酸、苏氨酸、色氨酸、缬氨酸。
必需氨基酸衍生物(神经内分泌新陈代谢):
γ-氨基丁酸、甘氨酸、丝胺酸、牛磺酸、酪氨酸。

氨/能量新陈代谢:
a-氨基已二酸、天门冬酰胺、天门冬氨酸、瓜氨酸、谷氨酸
、谷氨酰胺、鸟氨酸。

硫新陈代谢:
半胱氨酸、胱硫醚 、同型半胱氨酸。

附加代谢物:
α-氨基正丁酸 、丙氨酸、鹅肌肽 、b-丙氨酸、b-氨基异丁酸、肌肽、乙醇胺、δ-羟基赖氨酸 、羟化脯氨酸、1-甲基组氨酸、3-甲基组氨酸、磷酸乙醇胺、磷酸丝氨酸、脯氨酸、肌氨酸、精氨(基)琥珀酸、羟化瓜氨酸、正缬氨酸、正异亮氨酸、总血浆合计。
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Last edit by zongguitang
戈壁明珠
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生物质谱可以做高分子研究和许多别的东西,能给出蛋白质的氨基酸顺序,一,二,三,四级结构。
氨基酸测序仪可能只能用于蛋白质测序,氨基酸测序仪对蛋白纯度要求较高,前处理比较麻烦.对复合蛋白的鉴定有困难.
但是采用氨基酸测序仪的方法还是要普遍些,如果你们没有仪器,建议你在网上搜一下,很多公司可以做这方面的工作。
戈壁明珠
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1、样品不能含有下列会干扰蛋白测序的物质:
去污剂(Detergents)/ 盐分(Salts)/ 非挥发性缓冲液(Non olatile buffers) /
胺(Amines)/氨基酸(Amino acids);
2、避免因吸附而导致的样品丢失:
表面吸附往往会导致样品的回收率较低,下面一些小窍门有助于解决这个问题:
避免透析,不要让样品干透,用尽可能小的管,特殊的疏水性蛋白,最多可加SDS 至0.05 %以
减少吸附损失。
3、在SDS-PAGE 电泳纯化蛋白时,注意下面一些事项:
1)每三至四周配置一次丙烯酰胺储液;2)聚合过夜使胶聚合充分;3)用尽可能薄的胶来分离;4) 上样之前预电泳数分钟,充分上样;5) 使每条带能有1-5 ug的目的蛋白。
maldiguy
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如果你的样品只能银染才能看到,用现在常规的edman降解方法是没办法做的。Edman需要微克级的蛋白样品。国内现在做edman degradation的大学和研究所还是有一些的。
另外一个方法就是质谱,这需要你对你自己的蛋白有一定的了解,比如大致序列,跑SDS之前样品的纯度等。
如果有兴趣,可以联系我
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