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毛细管电泳（CE）
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主题：【讨论】节后第一讨论贴--已知解离常数预测出峰顺序！

浏览0 回复14 电梯直达
nini2006
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发表于：2013/02/19 16:40:10 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
假设用最简单的CZE模式分离以下氨基酸，用的是最简单的磷酸-硼酸缓冲溶液，pH为9.0，没有任何其他有机添加剂，请预测其出峰顺序。



参与有奖，有附机理讨论的重赏！



特别提醒：

出峰顺序这东西，只能理论预测一下而已，实际上的顺序跟理论预测的有可能会千差万别。特别是当背景电解质比较复杂，有胶束有有机溶剂的时候，出峰顺序更是无法预测。


另外，以上条件是我假想出来的，自己也没做过，如果按这个条件去做有可能得到的是一团峰，根本分不出来。之所以想要发这样的帖子，主要是想跟大家探讨一下溶液pH值与解离度和出峰顺序之间的关系。所以大家千万不要用这个条件做外参考哦，万一误导了大家的话那真的是伤不起了。
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nini2006
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2013/2/19 17:06:36 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
忘记附分子量了。
V: 117.15
L: 131.17
I: 131.17
F: 165.19
W: 204.23
K: 146.19
T: 119.12
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2013/4/25 22:35:08 Last edit by nini2006
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2013/2/21 20:24:11 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
是不是很有难度？呵呵
大家都不敢来发言呢……
咱也回去好好考虑考虑再给答案……
该帖子作者被版主 nini2006加 3积分， 2经验，加分理由：欢迎参与！
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nini2006
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2013/2/21 21:19:44 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 flysky97(flysky97) 发表:
是不是很有难度？呵呵
大家都不敢来发言呢……
咱也回去好好考虑考虑再给答案……
不难吧？就比较荷质比而已嘛。

提示一下：R-COOH在这个pH下都成R-COO-，也就是带一个负电荷，剩下的就考虑R-NH2而而已了（pKa或pKb=pH是考察弱电解质在溶液中是否解离的分界点）。确定了电荷，再结合分子量，顺序就出来了。

当然，还要考虑pI值，pH=pI值的时候整个物质呈电中性。因为羧基带负电，胺基带正电，正好中和了。
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2013/2/21 21:25:49 Last edit by nini2006
flysky97
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2013/2/24 0:07:04 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
对于赖氨酸pI>9.0 ，其他均<9.0 赖氨酸第一个出来；
分子量由大到小（其倒数由小到大顺序）为：
色W: 204.23
苯F: 165.19
赖K: 146.19
亮L: 131.17＝异亮I: 131.17
苏T: 119.12
缬V: 117.15
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flysky97
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2013/2/24 0:09:22 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我先猜一下顺序（不对莫怪）：
赖氨酸Lys
色氨酸try
苯丙Phe
异亮氨酸iso
亮氨酸leu
苏氨酸thr
缬氨酸val
该帖子作者被版主 nini2006加 10积分， 2经验，加分理由：谢谢参与
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nini2006
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2013/2/24 22:57:38 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 flysky97(flysky97) 发表:
我先猜一下顺序（不对莫怪）：
赖氨酸Lys
色氨酸try
苯丙Phe
异亮氨酸iso
亮氨酸leu
苏氨酸thr
缬氨酸val
flysky果然专业哈，厉害！

我这里可没有“标准答案哦”，过两天我再把我的顺序排出来看跟你的是否有出入。

再等等看是否还有别的网友给出其他答案。
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nini2006
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2013/3/15 15:09:28 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
发现还是有版友关注了这个帖子的，可是就是没有人大胆站出来说想法。害羞？哈哈
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nini2006
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2013/3/15 15:13:21 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
其实出峰顺序这东西，只能理论预测一下而已，实际上的顺序跟理论预测的有可能会千差万别。特别是当背景电解质比较复杂，有胶束有有机溶剂的时候，出峰顺序更是无法预测。
另外，这个条件是我假想出来的，自己也没做过，如果按这个条件去做有可能得到的是一团峰，根本分不出来，所以大家千万不要用这个条件做外参考哦，万一误导了大家的话那真的是伤不起了。
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wy20071722
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2013/4/25 19:49:07 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这个东西我想可能跟质量的关系不大，应该主要跟阻力有关，因为如果力平衡的话，就跟质量没关系了。等电点不同，解离度不同。主要跟电荷和半径有关系。考虑解离度不同，顺序：
赖
苏
异亮
亮
缬
色
苯丙
这个没有考虑和溶液缓冲离子的相互作用影响，像后面几个pH接近，特别像亮和异亮，可能分不开，不清楚他们之间分子大小和电动势的差异，有可能会出峰与预测相悖，但这样的话不相符的部分迁移时间应该是接近的。
分离不同等电点的应该是用等电聚焦来做吧。
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nini2006
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2013/4/25 22:16:36 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 wy20071722(wy20071722) 发表:
这个东西我想可能跟质量的关系不大，应该主要跟阻力有关，因为如果力平衡的话，就跟质量没关系了。等电点不同，解离度不同。主要跟电荷和半径有关系。考虑解离度不同，顺序：
赖
苏
异亮
亮
缬
色
苯丙
这个没有考虑和溶液缓冲离子的相互作用影响，像后面几个pH接近，特别像亮和异亮，可能分不开，不清楚他们之间分子大小和电动势的差异，有可能会出峰与预测相悖，但这样的话不相符的部分迁移时间应该是接近的。
分离不同等电点的应该是用等电聚焦来做吧。


1、毛细管电泳的基本分离原理就是根据荷质比不同而达到分离的呀，所以跟分子量有大关系的。

2、按照CE分离的基本原理，亮氨酸和异亮氨酸是分不开的，但是实际上这两个物质还是比较容易分离的，因为他们是同分异构体而非手性物质，结构有差别。（该例子正好说明了CE分离机理的复杂性）

3、分离氨基酸不需要等电聚焦，蛋白质才需要。氨基酸分离的最常用模式就是CZE和MEKC.。
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2013/4/25 22:47:12 Last edit by nini2006
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