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毛细管电泳（CE）
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主题：【讨论】节后第一讨论贴--已知解离常数预测出峰顺序！

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nini2006
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2013/4/25 23:41:14 12楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
好啦，轮到我摆出我的预测啦！！！！！！
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nini2006
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2013/4/25 23:41:51 13楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
以下讨论全部以CZE为前提，且GBE只有缓冲溶液，没有任何其他添加剂（如有机溶剂）。
要预测出峰顺序，首先得弄清楚这个物质的酸碱性。如果是弱酸性物质，在羧基完全解离的情况下，物质带负电荷，则荷质比越大出峰时间越晚。如果是弱碱性物质，完全电离时物质带正电荷，出峰顺序正好反过来，即荷质比越大，出峰时间越短。
另外酸性物质，pKa>pH时，羧基解离；碱性物质，pKa<pH时，碱基解离。
在此理论下，以上给出的所有氨基酸，带的电荷都是一样的：pH都大于pKa1，所以所有氨基酸的羧基均解离，带一个单位负电荷。而所给的pH也都小于pKa2（K除外），所以氨基也都解离并带上一个单位正电荷。对于K，pH小于pKa2，氨基没有解离，但是它有一个碱性的R基，并且pKR大于pH，所以也是带上了一个单位的正电荷。
再者，该缓冲体系为碱性（pH 9.0），且远远大于pKa1，所以氨基的作用占主导地位，也就是说，在这个buffer条件下，氨基的影响起主要作用，这些氨基酸所带的有效电荷应为正电荷。符合上面说的碱性物质出峰顺序的原则：即荷质比越大，出峰时间越短。
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2013/4/26 1:24:17 Last edit by nini2006
nini2006
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2013/4/25 23:42:20 14楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
荷质比从大到小为：V、T、L=I、K、F、W，所以理论上的出峰顺序也是V、T、L=I、K、F、W。

但是，但是！！！！！！

大家一定要知道，K（赖氨酸）的侧链是这些氨基酸当中唯一呈碱性的，所以K一定是必须是最后出峰！另外，我自己的实验经验，I比L先出峰。

所以，最后的出峰顺序为：V、T、I、L、F、W、K
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2013/4/26 1:20:40 Last edit by nini2006
wy20071722
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2013/4/26 10:06:43 15楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 nini2006(nini2006) 发表:
原文由 wy20071722(wy20071722) 发表:
这个东西我想可能跟质量的关系不大，应该主要跟阻力有关，因为如果力平衡的话，就跟质量没关系了。等电点不同，解离度不同。主要跟电荷和半径有关系。考虑解离度不同，顺序：
赖
苏
异亮
亮
缬
色
苯丙
这个没有考虑和溶液缓冲离子的相互作用影响，像后面几个pH接近，特别像亮和异亮，可能分不开，不清楚他们之间分子大小和电动势的差异，有可能会出峰与预测相悖，但这样的话不相符的部分迁移时间应该是接近的。
分离不同等电点的应该是用等电聚焦来做吧。


1、毛细管电泳的基本分离原理就是根据荷质比不同而达到分离的呀，所以跟分子量有大关系的。

2、按照CE分离的基本原理，亮氨酸和异亮氨酸是分不开的，但是实际上这两个物质还是比较容易分离的，因为他们是同分异构体而非手性物质，结构有差别。（该例子正好说明了CE分离机理的复杂性）

3、分离氨基酸不需要等电聚焦，蛋白质才需要。氨基酸分离的最常用模式就是CZE和MEKC.。


学习了，谢谢
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