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主题：【求助】关于CE分离的几个疑问？

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hxlyy
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发表于：2013/03/15 09:39:16 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
最近在用CE对丹氨酸类进行手型拆分，主要是以下几种,

苯丙氨酸 Dns-phe  苏氨酸 Dns-Thr  蛋氨酸 Dns-Met  丙氨酸 Dns-Ala

丝氨酸 Dns-Ser  正頡氨酸 Dns-Nva 亮氨酸 Dns-Leu 色氨酸 Dns-Trp

选的磷酸体系缓冲液，pH6.0, 50ppm,拆分剂是正电型化合物，选用的5mM

但不知道为什么连样品峰都没有，更不要说是拆分了。。。刚看到版主在讨论丹氨酸类的分析（PH与PI类），所以，发帖子求问

第一次发帖，勿拍。。。
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2013/3/15 11:28:06 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
第一发帖，更加要多拍，不然怎么能引起关注呢，呵呵
楼主是完全不出峰吗
该帖子作者被版主 nini2006加 5积分， 2经验，加分理由：那就多带领大家一起来拍吧，哈哈
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hxlyy
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2013/3/15 11:48:28 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 老多_小多(emoc98311) 发表:
第一发帖，更加要多拍，不然怎么能引起关注呢，呵呵
楼主是完全不出峰吗


恩，基线，电流都很稳，EOF也正常，就是没有出峰。。。不知道为什么
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beyond1977
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2013/3/15 12:54:06 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这块没接触过，你可以问问nini版主，看了nini版主的帖子，会不会是你的ph太低了，导致这些组分还没出来，或许你可以加0.2psi的压力辅助分离看看
该帖子作者被版主 nini2006加 5积分， 2经验，加分理由：有道理哦
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2013/3/15 14:07:06 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 beyond1977(xsh6743) 发表:
这块没接触过，你可以问问nini版主，看了nini版主的帖子，会不会是你的ph太低了，导致这些组分还没出来，或许你可以加0.2psi的压力辅助分离看看
好厉害呀，我发的哪个帖子让你觉得是因为pH值低的缘故啊？我一点印象都木有了。
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2013/3/15 14:09:54 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
1、beyond斑竹说的没错，估计是pH值的缘故。提高pH值到9.0以上看看；

2、 另外，波长要选择好，Dns-AAs的吸收波长在214 -254nm；

3、选择电动进样；

4、这些物质都是在EOF之后出峰的，耐心点等待让它走1 h看会不会出来。

5、曾见过一篇分离Dns-AAs的paper，人家用的BGE浓度很低：20 mM NH4Ac，然后pH是5.0，手性selector是Cu(II)-complex，电压才13.6 kV。

仅供参考~
该帖子作者被版主 emoc98311加 3积分， 2经验，加分理由：积极应助
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2013/3/15 14:28:16 Last edit by nini2006
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2013/3/15 14:59:17 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 nini2006(nini2006) 发表:
1、beyond斑竹说的没错，估计是pH值的缘故。提高pH值到9.0以上看看；

2、 另外，波长要选择好，Dns-AAs的吸收波长在214 -254nm；

3、选择电动进样；

4、这些物质都是在EOF之后出峰的，耐心点等待让它走1 h看会不会出来。

5、曾见过一篇分离Dns-AAs的paper，人家用的BGE浓度很低：20 mM NH4Ac，然后pH是5.0，手性selector是Cu(II)-complex，电压才13.6 kV。

仅供参考~
我选的吸收波长是214nm,BGE浓度是50mM,电压是15kv...这些好像都差不多。。。另外，不是说pH要低于酸的解离值的吗？这样氨基酸才能电离？（不太懂，所以看到版主的那篇就想问问，谢谢啊）
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nini2006
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2013/3/15 15:08:50 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
对于羧基，pH高于pKa羧基才能解离，而氨基的解离则相反，pH要低于pKb才能解离。
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hxlyy
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2013/3/15 15:11:49 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 nini2006(nini2006) 发表:
1、beyond斑竹说的没错，估计是pH值的缘故。提高pH值到9.0以上看看；

2、 另外，波长要选择好，Dns-AAs的吸收波长在214 -254nm；

3、选择电动进样；

4、这些物质都是在EOF之后出峰的，耐心点等待让它走1 h看会不会出来。

5、曾见过一篇分离Dns-AAs的paper，人家用的BGE浓度很低：20 mM NH4Ac，然后pH是5.0，手性selector是Cu(II)-complex，电压才13.6 kV。

仅供参考~


另外，我的EOF值一般都是要在25min...我BGE也未添加任何有机溶剂，是溶液粘度太大的原因？

不甚感激啊
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nini2006
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2013/3/15 15:23:27 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 hxlyy(v2672048) 发表:
原文由 nini2006(nini2006) 发表:
1、beyond斑竹说的没错，估计是pH值的缘故。提高pH值到9.0以上看看；

2、 另外，波长要选择好，Dns-AAs的吸收波长在214 -254nm；

3、选择电动进样；

4、这些物质都是在EOF之后出峰的，耐心点等待让它走1 h看会不会出来。

5、曾见过一篇分离Dns-AAs的paper，人家用的BGE浓度很低：20 mM NH4Ac，然后pH是5.0，手性selector是Cu(II)-complex，电压才13.6 kV。

仅供参考~


另外，我的EOF值一般都是要在25min...我BGE也未添加任何有机溶剂，是溶液粘度太大的原因？

不甚感激啊
同样浓度下，磷酸盐的离子强度比NH4Ac要大，所以EOF会比NH4Ac体系的要慢。25 min，真是有点慢了。如果必须要这个浓度的话，你可以提高电压。根据我的经验，你这个浓度，电压上到25、27 kV应该都不会有问题的。另外，你一针跑了多长时间？
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2013/3/15 15:23:48 Last edit by nini2006
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2013/3/15 15:24:41 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
关于预测出峰顺序的那个帖子，我做了点说明，希望大家再看看。不要被误导了才好啊。
http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20130219/4574102/
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