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主题：【求助】新人求助！食醋中苯甲酸回收率低

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母鸡哥哥
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发表于：2013/06/26 19:03:59 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
悬赏金额：20积分 状态： 已解决
向各位老师请教：我做食醋中苯甲酸，30g样品加了4000ug，但是回收率只有70%多一点，很着急，请大家指点指点

1、我用的是乙酸铵（0.02mol/L）:甲醇=95:5的流动相，配乙酸铵的时候没加冰乙酸，影响大么？

2、我将食醋稀释10倍，然后调PH接近中性后除蛋白，离心，过滤，进样。调PH有必要么？调过之后是不是苯甲酸都变成苯甲酸钠了啊？

3、标准品是1000ppm的苯甲酸标准溶液用水稀释成的浓度系列，最小5ppm，最大100ppm

4、我也用标准加入法计算了，算出的食醋（稀释10倍）本底浓度80多个ppm（调过PH的），没调PH的也做了一次，只有70多个ppm

请各位帮我分析一下原因，拜托了！！！！！！！
推荐答案：tiantaishan回复于2013/06/26
2、我将食醋稀释10倍，然后调PH接近中性后除蛋白，离心，过滤，进样.

此过程是离心后是否定容（必要时定容体积为5%甲醇的量）？？不用调节PH值，标准中的沉淀剂是乙酸锌和亚铁氰化钾，沉淀剂就含有比较高的乙酸，调节没有必要。

离心后可以不用过滤，离心转速要在3000r/min以上，大致5-10分钟；加标精确控制体积。

另外，加标的浓度稍微有点低（特别是国产仪器），出峰要分离完全，不能和样品基质有干扰。
补充答案：

老多_小多回复于2013/06/26

乙酸铵流动相没必要加乙酸，不管你是否调PH，苯甲酸钠还是电离为苯甲酸

houjjun回复于2013/06/27

70%也还算可以,是不是过滤时等前处理环节有较大的损耗了

该帖子作者被版主 cminzhen加 4积分， 2经验，加分理由：积极求助！
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老多_小多
emoc98311
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2013/6/26 21:06:44 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
乙酸铵流动相没必要加乙酸，不管你是否调PH，苯甲酸钠还是电离为苯甲酸
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母鸡哥哥
v2752191
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2013/6/26 21:42:43 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
好的，谢谢，那大家能帮我分析分析怎么回收率这么低啊？
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tiantaishan
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2013/6/26 22:31:06 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
2、我将食醋稀释10倍，然后调PH接近中性后除蛋白，离心，过滤，进样.

此过程是离心后是否定容（必要时定容体积为5%甲醇的量）？？不用调节PH值，标准中的沉淀剂是乙酸锌和亚铁氰化钾，沉淀剂就含有比较高的乙酸，调节没有必要。

离心后可以不用过滤，离心转速要在3000r/min以上，大致5-10分钟；加标精确控制体积。

另外，加标的浓度稍微有点低（特别是国产仪器），出峰要分离完全，不能和样品基质有干扰。
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母鸡哥哥
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2013/6/27 8:55:42 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊

谢谢楼上的老师。有些地方还是不明白
楼上老师说“离心后定容”，那我刚开始就不用稀释了，直接除蛋白、离心、移出液体定容，是这样吗？
老师说的（必要时定容体积为5%甲醇的量），是不是用流动相定容，还是用5%甲醇95%水定容？
离心后不用过那种一次性的滤头啊？
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母鸡哥哥
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2013/6/27 18:47:32 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
谢谢之前回答的两位老师。
今天又重新加标做了。95%左右。之前可能是加标不准确或者均一性差。但是保留时间提前了接近1min。5分钟左右提前到4分钟左右，郁闷！！困惑！！
我用的是乙酸铵（0.02mol/L）:甲醇=95:5的流动相，0.8ml/min
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houjjun
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2013/6/27 19:21:12 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
70%也还算可以,是不是过滤时等前处理环节有较大的损耗了
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tiantaishan
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2013/6/27 19:52:00 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
具体操作是稀释10倍后，加入沉淀剂，摇匀（不用调PH），然后定容。取一部分溶液离心（当然1万转/min最好，离心5min).去上层溶液直接测定（可以不用过滤，当然UPLC必须过滤）。

保留时间提前可能是柱子没有平衡好或有气泡，当然也有可能配置的流动相浓度有差异，不完全一样（液相条件一样的话）
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母鸡哥哥
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2013/6/28 16:32:53 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
非常感谢楼上两位的回答！
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