主题:【讨论】加根什么样的柱子避免样品峰与溶剂峰相连?

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flyingsward
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  DMF流动相, 两根PL-mixed C柱, 在做Mn10000左右及以下的分子量的样品时,峰都和溶剂峰相连,请问各位要加一根什么样的柱子,可以避免这种情况呢?
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小不董
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  DMF流动相, 两根PL-mixed C柱, 在做Mn10000左右及以下的分子量的样品时,峰都和溶剂峰相连,请问各位要加一根什么样的柱子,可以避免这种情况呢?


至少加mixed-D以下的柱子。

楼主用DMF流动相,多少温度?压力多少?
flyingsward
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  DMF流动相, 两根PL-mixed C柱, 在做Mn10000左右及以下的分子量的样品时,峰都和溶剂峰相连,请问各位要加一根什么样的柱子,可以避免这种情况呢?


至少加mixed-D以下的柱子。

楼主用DMF流动相,多少温度?压力多少?


温度50 压力8.82左右, 加根mixed-E还是单一孔径住呢?
小不董
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mixed-E最高到30万, 可以的,但我怕你和mixed-c混用后,在30万容易出现峰变形,最好用单一柱子比较好,也看你样品的分子量大概在什么位置。
单一孔径问题可能会更大。
压力有8.82有点大了哈,没办法,DMF粘度太大,已经50度了,用了PL-50就没办法升高温度了。若你再加根mixed-E压力都要超过10bar了。如果可以,建议还是用两根mixed-e的柱子吧。
flyingsward
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mixed-E最高到30万, 可以的,但我怕你和mixed-c混用后,在30万容易出现峰变形,最好用单一柱子比较好,也看你样品的分子量大概在什么位置。
单一孔径问题可能会更大。
压力有8.82有点大了哈,没办法,DMF粘度太大,已经50度了,用了PL-50就没办法升高温度了。若你再加根mixed-E压力都要超过10bar了。如果可以,建议还是用两根mixed-e的柱子吧。


单一孔径柱会有什么问题呀?我现在用加溴化锂的流动相配置样品,似乎可以很大程度上解决样品峰与溶剂峰相连的问题。
flyingsward
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mixed-E最高到30万, 可以的,但我怕你和mixed-c混用后,在30万容易出现峰变形,最好用单一柱子比较好,也看你样品的分子量大概在什么位置。
单一孔径问题可能会更大。
压力有8.82有点大了哈,没办法,DMF粘度太大,已经50度了,用了PL-50就没办法升高温度了。若你再加根mixed-E压力都要超过10bar了。如果可以,建议还是用两根mixed-e的柱子吧。


是的,之前是7.8左右,这次是刚换的保护柱还没做样,压力就这么大>但经常是做了几十个样品,我们用跟踪的单标样品的PDI就会变大,然后排查后就会发现是保护柱的问题,其实压力根本没有变大,所以我们现在经常是做几十个样品就要更换保护柱,费用很大,请问您遇到这样的问题吗?怎么解决的呢?
小不董
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那就是你流动相中的溶剂峰的影响,用流动相来溶解样品是最好的解决办法。若能分离开就好,虽然mixed-C线性分子量范围是200-2000000,若你样品中分子量有很大的,用这个柱子是很好用的,若分子就在几万的话, 用mixed-d就会更好,范围是200-400000,若分子量更小就选择mixed-E,最高300000。
小不董
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mixed-E最高到30万, 可以的,但我怕你和mixed-c混用后,在30万容易出现峰变形,最好用单一柱子比较好,也看你样品的分子量大概在什么位置。
单一孔径问题可能会更大。
压力有8.82有点大了哈,没办法,DMF粘度太大,已经50度了,用了PL-50就没办法升高温度了。若你再加根mixed-E压力都要超过10bar了。如果可以,建议还是用两根mixed-e的柱子吧。


是的,之前是7.8左右,这次是刚换的保护柱还没做样,压力就这么大>但经常是做了几十个样品,我们用跟踪的单标样品的PDI就会变大,然后排查后就会发现是保护柱的问题,其实压力根本没有变大,所以我们现在经常是做几十个样品就要更换保护柱,费用很大,请问您遇到这样的问题吗?怎么解决的呢?


说明你样品很容易污染柱子,过滤样品会好很多。
histone1
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骑乌龟去流浪
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mixed-E最高到30万, 可以的,但我怕你和mixed-c混用后,在30万容易出现峰变形,最好用单一柱子比较好,也看你样品的分子量大概在什么位置。
单一孔径问题可能会更大。
压力有8.82有点大了哈,没办法,DMF粘度太大,已经50度了,用了PL-50就没办法升高温度了。若你再加根mixed-E压力都要超过10bar了。如果可以,建议还是用两根mixed-e的柱子吧。


单一孔径柱会有什么问题呀?我现在用加溴化锂的流动相配置样品,似乎可以很大程度上解决样品峰与溶剂峰相连的问题。


请问你测试的样品和流动相是极性的吗,溴化锂添加的浓度是多少?
小不董
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原文由 histone1(histone1) 发表:
PL mixed-E 是30k吧,300k那不是和mixed-D差不多了?


最大分子量相差10K,看似不大,但相对分子量数量本身就小的来说,还是相差比较大,而且一个是3um的,一个是5um的,柱效相差比较多的。
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