主题：[求助]单氨类,如5-HT 的 CE-LIFD测定 用FITC衍生,哪位高人指点一下?

请将你遇到的问题说的具体一点，如和文献的什么地方对不上？
这样其他人就会更好地为你解答，谢谢。

我的缓冲液的配法是跟这个方法的:
A 0.1 mmol/L stock solution of 5-HT was prepared in 0.01 mol/L cold
perchloric acid and stored at 4C before use.

A 0.45 mmol/L of FITC stock solution was prepared with acetonitrile containing 0.8% v/v methanol and 0.5% v/v pyridine. A 45 mmol/L of FITC working solution was prepared from the above stock solution with further dilution by using the same acetonitrile mixture solution.

A 0.05 mol/L Na2HPO4 derivatization buffer solution was prepared by dissolution of 7.80 g/L of Na2HPO4 in deionized water, adjusted to pH 10.95 with 1.0 mol/L NaOH.

A 40 mmol/L sodium tetraborate and 60 mmol/L boric acid mixture buffer solution was adjusted to pH 9.0 with 1.0 mol/L NaOH and was used as the background electrolyte (BGE). The working solutions of 5-HT standards were diluted with this BGE solution.

衍生化：　Ten mL 1.0 mmol/L PAs or CAs working solution or extracts　was mixed with 10 mL of 45 mmol/L FITC, 200 mL　0.05 mol/L Na2HPO4 buffer, and 200 mL water, vortexed　and reacted in the dark at 257C for 6 h.

进样：　Samples were injected by pressure at 0.5 psi for 20 s, and separations were performed under 25 kV for 20 min with a positive
high voltage.

我的结果是，大部分时候 5-HT 都出不了峰，有两次出了（跟空白对照）,但后来又重复不到．同时做了几个不同浓度的反应，１，１０，１００微克／Ｌ，加了同样量的ＦＩＴＣ，只有１０的那个浓度出了个峰，１００　的那个浓度也有一个分叉的峰，但迁移时间推后了大概两分钟，对不上．

原文由 echozxjjj 发表:
我的结果是，大部分时候 5-HT 都出不了峰，有两次出了（跟空白对照）,但后来又重复不到．同时做了几个不同浓度的反应，１，１０，１００微克／Ｌ，加了同样量的ＦＩＴＣ，只有１０的那个浓度出了个峰，１００　的那个浓度也有一个分叉的峰，但迁移时间推后了大概两分钟，对不上．

我没有做过衍生化测定，但是从你给的信息看，至少峰还是有的，能出峰的那个样品不能重复出峰？有两个原因，样品不稳定或仪器不稳定
如果是不同浓度有的不能出峰，那还有就是衍生化本身的问题，是不是没有衍生完全。

我也考虑过，但比较费解的是高浓度的结果．出了一个分叉峰，时间又差的太远．

原文由 echozxjjj 发表:
我也考虑过，但比较费解的是高浓度的结果．出了一个分叉峰，时间又差的太远．

会不会是衍生出了不只一种物质？或者你减小一下进样量，因为0.5psi,20s,进样量是比较大的。

是的有很多副产物，不过原文献里的副产物都在后面．低，中浓度的样品也没有这个大峰．或者我再按比例加衍生化试剂做一次看看吧．谢谢大侠！

改了衍生的缓冲系统,pH 10 不行,换到9.3出峰了.那篇劳什子的,还是美国人做的呢,一样造假!

呵呵，做出来了就好，恭喜楼主。
据说，就文献的可信度而言，欧洲国家的最高。

谢谢版主，请问如何结贴？

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