主题：【求助】液相色谱柱平衡时吸光度问题

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可能是溶剂切换的原因，是不是执行平衡色谱柱程序前后的流动相不一样或者比例不一样

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可能是溶剂切换的原因，是不是执行平衡色谱柱程序前后的流动相不一样或者比例不一样

平衡色谱柱有一个梯度方法，就是从纯甲醇过渡到我要用的条件下，如下图

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可能是溶剂切换的原因，是不是执行平衡色谱柱程序前后的流动相不一样或者比例不一样

平衡色谱柱有一个梯度方法，就是从纯甲醇过渡到我要用的条件下，如下图

你的梯度开始时100%的B但是你再执行该程序的之前流动相走的是什么？还有仪器有自动归零功能，也有可能是自动归零的影响

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1min变化50%，太快了，即使你完全平衡，基线也可能很糟糕，从来没见过这种梯度，用到3个流动相来洗脱，前面基线有问题可能就是因为流动相变化太快

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1min变化50%，太快了，即使你完全平衡，基线也可能很糟糕，从来没见过这种梯度，用到3个流动相来洗脱，前面基线有问题可能就是因为流动相变化太快

好吧，流动相里 A：水  B：甲醇  D：缓冲盐。每次平衡结束后基线也挺好的。我的问题是吸光度为什么一直是 - 4.0 呢？

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可能是溶剂切换的原因，是不是执行平衡色谱柱程序前后的流动相不一样或者比例不一样

平衡色谱柱有一个梯度方法，就是从纯甲醇过渡到我要用的条件下，如下图

你的梯度开始时100%的B但是你再执行该程序的之前流动相走的是什么？还有仪器有自动归零功能，也有可能是自动归零的影响

一般开机平衡，我都是从零开始的，系统保存在纯甲醇中，流速是0。在这之前没有别的流动相在走的

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1min变化50%，太快了，即使你完全平衡，基线也可能很糟糕，从来没见过这种梯度，用到3个流动相来洗脱，前面基线有问题可能就是因为流动相变化太快

好吧，流动相里 A：水  B：甲醇  D：缓冲盐。每次平衡结束后基线也挺好的。我的问题是吸光度为什么一直是 - 4.0 呢？

你是新手吧？从你平衡设置的梯度跟表述能看出个一二来。从你前面的色谱图来看0min时压力为0psi，也就是说你进样前莫非停了流速后在去运行你的方法，不然咋么也不可能压力0-2min从0变到2000多psi，你先把急剧变化的压力这段跟我讲清楚我才好跟你分析，把你的洗脱梯度也一并提上来。