主题：【讨论】基质效应影响检测结果

张老师也是专家级别了，我持续关注学习

1.改变出峰时间。一般内源性物质极性大，先出。可以将待测物出峰时间拖后。
2.换一下制样方法。
3.如果LLOQ能做到，可以将样品稀释，这样的话基质也就被稀释了，基质效应也小了。

基质效应问题一直是我们遇到的大问题，刚看到了，想和大家交流一下，我的几点建议是：
1）最好是优化前处理方案，从根本上解决基质效应问题。如果是液液萃取，改用提取效率更高的提取剂；如果SPE估计关系不大；如果蛋白沉淀，更高的沉淀或稀释倍数，一般不建议改用无机盐，但得根据实际需要。另外，牵涉灵敏度能否达到的问题。
2）优化色谱条件，一般的基质抑制主要是前沿峰里的混合物质，最好是检测物与前沿峰完全分离。当然了，可以增加一些提高信噪比的物质，这些需根据离子化加合的物质选择。也可以使用梯度洗脱，既可以减少前沿基质，又能提高信噪比。
3）当然了，有些仪器可以通过特殊的方法专门考察一下基质效应所引响的区域，从三通阀处用针泵恒速进样检测物，用液相进样含基质的空白基质处理液，检测会看到基质抑质的倒峰。
4）优化离子源参数，以实际响应的提高为标准。
6）对于内源性基质抑制就很难处理了，要一步步去寻找根源和减少抑制。

查到的基质效应的相关知识
1 、基质（matrix） 尚无统一的解释，曾称为“一种分析物（analyte）的环境（milieu）”，即指标本中除分析物以外的一切组成。以血清胆固醇（Chol）测定而言，就是指Chol以外血清中的一切成分及其物理、化学性质。

2、基质效应（matrix effect） 按NCCLS文件的定义，指

（1）标本中除分析物以外的其他成分对分析物测定值的影响。

（2）基质对分析方法准确测定分析物的能力的干扰。广义说来，基质效应也应包括已知的干扰物（如Chol测定中胆红素、血红蛋白、抗坏血酸等都是干扰物），但目前只将基质效应限于生物材料中未知或未定性的物质或因素（如粘度、pH等）的影响。


3、基质偏差（matrix bias） 基质效应所致分析结果的偏差称为基质偏差。 用作校准物质或质控物的经过处理的混合血清，由于血清基质的理化性质在处理过程中的改变，在常规测定上往往出现基质偏差。 基质偏差的出现也与分析系统（包括方法、试剂及所用仪器设备）有关，所以有人将基质效应定性为方法、材料与基质的特异性反应。

4、制备物（processed material） 用于血脂常规测定的校准液（calibrator）及用于技能对比试验（proficiency test，PT）或室间质量评价（EQA）的样品（如质控血清）。 以Chol测定为例，全酶法测Chol始于1974年，在此以前用化学反应测Chol时，除了一些已知的干扰因素外尚未提及基质效应问题。1979年才由Cooper指出Chol酶法中校准液与病人血清的反应性不同，可使Chol测定值偏低5%～7%。 1994年CAP调查570实验室时用了参考方法定值的新鲜冰冻血清为调查材料，15个同方法测定chol组中仍有11个组出现基质偏差，同时用制备物的4个组中，3个有基质偏差。 有的报告指出TG、HDL-C常规方法与CDC的参考方法比较，有明显偏差，甚至>10%。McNamura等发现血清冰冻可在免疫法（用apoAI与E抗体分离LDL）直接测定LDL-C时出现明显基质效应，血清冰冻保存2～26周后，LDL-C测定值平均偏低10%左右。 由于新鲜血清与冻干血清的apoAI测定值一致，显示冻干对apoAI测定不产生基质效应，故apoAI参考血清以冻干形式提供。但冻干对apoB有极明显的影响，在不同原理的免疫法中，基质偏差高达-26%～+4%，但这种变化也包括apoB分子本身的结构变化在内。所以apoB参考血清是液态冰冻保存的。

5、减少基质效应的方法 ： Naito等（1993年）提出过减少基质效应的研究方向，至今仍有参考价值：改进室间质评样品，使其作用更像新鲜人血清。 改进仪器设计及试剂组成。 选择方法及方法学参数，使其适应性更强，且容易掌握，对制备物（校准物、室间质评样品与质控物）基质的确切性质不敏感。

      瞬间离子基体效应 moment ion matrix effect 离子的有效淌度受到周围离子的影响，由其周围离子所形成的包围圈，称为离子基体。如果样品组分从进样点到探测点迁移过程中，在某一时间间隔遇上一个不同组成的基体区带，这个离子基体区带就将对样品组分产生影响，使它们的淌度发生瞬时变化，从而选择性地影响溶质的迁移和分离，这就是瞬时离子基体效应。

基质效应的评价
医学和实验室职业团体以及公众，对生物液体测试准确度的关注增加了。适当的规则意味着提高了测试步骤的准确度。重新强调了在临床，参考和医生的官方实验室，用外部质量评价方案（EQAS）和内部测试（PT）来评价和监测测试的准确度的重要。

目前的科学数据表明，由于基质效应，存在于许多外部控制材料中，这样的EQAS结果的使用并非总是可行的。这些处理过的材料（包括质量控制和定标材料）有时的表现不同于实验室日常分析的新鲜样本。新鲜的生物液体没有产生的偏差，在EQAS，控制和定标材料中经常见到。由于这些基质效应，用PT评价实验室测试准确度的性能可能导致不准确的结论和可能的不恰当管理批准。

基质效应现象与分析测试中四种主要组成部分的相互作用有关：仪器设计，试剂配方，方法原理，控制，定标和PT材料的成分及处理技术。这些类别中的每一种都是对偏差的大小和方向（正向或负向）有贡献的因素。引起基质效应的相互作用是复杂的，并且由于学科（化学，血液学）和每种方法用于定标和监测特性的材料的本性不同而不同。可以料想到细胞悬浮液的性能特征与去蛋白滤过液不同。

需要进行研究来定性这些干扰因素，以便设计仪器，试剂和液体最小化这些干扰。在那以前，方法的标准化和实验室测试准确度的评价和监测是困难的。

本文件是EP7-临床化学的干扰测试的补充。它们在提供方案以帮助确定可能影响患者护理的误差来源和/或评价方法的适用性方面是相似的。它们在以下方面存在区别：

1）EP14主要关注处理过的样本和患者样本件的差别，而EP7集中注意于特定的物质或条件如一种干扰物质的存在或粘性的改变，怎样改变了患者样本的结果。

2）为了评价干扰的影响，EP14将处理过的样本与患者样本比较，而EP7在干扰增加量的存在中，用基于方法精密度和分析物的内部个体差异的标准。

3）用于确定影响是否存在的标准，在EP14中取决于来自患者样本的结果在最适线周围的分布，而EP7用一系列包含已知的不同量的被研究物质（或条件变化）的相关混合物的重复性测定的不确定性。

4）EP14将处理过的样本的相对偏差与患者样本比较，而EP7的目的是定量观察到的偏差，作为在特定分析物浓度的干扰物质（或其他特性）的浓度函数。

基质效应的评价基于这样的原理，即观察到的反应与真实的活性或浓度间的关系取决于测试时的环境条件（如温度或基质）。因为没有测定技术是完全科学的，观察到的任意两种方法间的关系，取决于比较选择的样本。对临床实验室分析，设计方法是用来测定患者样本的浓度或活性，并且一组典型样本被用作比较的标准。

基质效应的大小，用来自两种被比较方法的典型的患者样本的结果的分布的比较来评估。就干扰物质存在而言，样本越不同，可料想到数据越分散。

在处理过的样本中测量到的偏差的大小，与患者样本的综合分散度比较。表示被评价方法测试的不确定性的这个残留的分散度应归因于两个因素：不精密度和非特异性。（本方案所用的回归技术使用如下假设，X轴表示的比较方法没有误差。）通过重复性测试减小不精密度的贡献，因此，在这些分析中，对分散度的主要贡献是因为那些已知或未知物质的固有干扰（这里称为基质效应）。分散的范围用预期间隔来表达，它评价了被评估方法对所有将被测试的患者样本的非特异性。然后可以断言，对于被测试的分析物用处理的样本表示患者样本是否具有合理的可能性；如果处理的样本的结果超出预期的间隔，则基质效应存在。

另外，如果一系列处理过的样本是相关的（这是在EQAS或PT中的常见情况），例如，由普通收集物混合而准备，回归这些样本的结果和比较最适直线与预期间隔可被用作评价的均值。如果对所有相关的处理样本，基质效应偏差在预期的间隔内，但不是恒定的或显示一种关系，这个技术特别有用。

来自本研究的任何结论都受处理过的样本的特定差异的限制，如生产批号，添加到样本中的分析物的来源，可能存在的稳定剂的来源等等。随后的研究可能需要确定观察到的偏差的来源。

本方案需要下列材料：

1）被评价方法的试剂，定标液和仪器系统。

2）比较方法的试剂，定标液和仪器系统。使用处理过的定标液或控制样本时预期显示小的或没有基质效应的方法。按优先顺序排序，比较方法应当符合下列描述，例如：

a） 国际参考系统（NRSCL）定义的方法（例如，胆固醇同位素稀释质谱分析法）；

b）NRSCL参考方法（例如，胆固醇Abell-Kendall方法）；

c）NRSCL认可设计的比较方法。

d）特定分析物普通使用的方法。

注意：尽管理想的比较方法应当没有基质效应，但这并不是绝对要求。从实践的原因来说，一个经常使用的临床方法可被选为比较方法。但是，当觉察到基质效应时，从方案中获得的信息仅说明患者样本和处理过的控制液在用两种方法测定一种特定分析物时没有产生可比较的结果。本方案不确定被评价方法还是比较方法具有更好的特异性。

a）处理过的样本，例如，定标液，被研究的控制样本。

b）浓度或活性大约均匀分布在感兴趣的处理过的样本的浓度范围的20个新鲜的患者样本。选择典型的用于分析的患者样本（例如，健康和患者样本），并且避免那些由于存在已知的干扰而被认为不适于分析的样本。如果冷冻不影响两种中任意一种方法的测定，也可包括冷冻样本。

没做过血液，是不是血液中基质更复杂些。

样品稀释后基质是小了，但农药的峰也小了，像有些样品的基质峰都集中在8min以前，这样凡是8min以前出的农药很难判断是基质还是农药。

浓度越低基质效应肯定月底，稀释就是这个原因吧，但是稀释被测物质也随之降低，所以需要适当稀释。