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主题：【求助】小白关于HPLC的几个问题

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疯狂的麦子
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发表于：2014/06/26 17:16:28 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
悬赏金额：20积分 状态： 未解决
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以前从没有接触过HPLC所以提的问题可能有些白痴，希望大牛们耐心解答
想要利用HPLC方法测定植物内源激素ABA，本来是利用ELISA方法的，但是听说认可度不高，所以就选择了HPLC法。
1.因为我只是测定这一种激素ABA，所以购买标准品的话只需要购买ABA的标准品对么？谁能给我推荐下哪个公司的标准品好呢？Sigma的？
2.关于HPLC色谱柱子的选择，我测定内源激素应该选用什么规格的色谱柱子呢？反相柱子还是正相柱子，另外固定相选择什么？C18的可以么？求大牛解答。
3.关于流动相的选择，有没有人做过内源激素的，想看一下你们流动相是怎么选择的，还有是怎么进行梯度淋洗的？我们实验室有进口HPLC色谱甲醇，使用前要过0.45微米的滤膜么?
4.关于HPLC水的选择，超纯水制备仪器实验室好像没有，应该选择什么代替呢？购买成瓶水可以么？能不能给推荐个，屈臣氏的去离子水可以么？
5.我的邮箱 553658540@qq.com。有没有大牛有以前做过或者摸索过的成熟的测定植物内源激素的方法给我发一份可以么？万谢
6.还有，我的实验设计是测定植物在胁迫下根部ABA含量的变化。测定24h内，没4h取一次样，进行测定，最后能不能把所有的峰都体现在一张图内呢？就是y轴是含量，x轴是时间（24h）的那种图?
7.提取中有N2吹干这一步，80%的甲醇水溶液怎么样区分是否将甲醇吹干了呢？还是直接全部吹干？
小白提问，希望大牛解答，另外邮箱前面是我qq，有做过的或者要做的我们可以一块聊聊，我是真的对这些一头雾水
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三人行
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2014/6/27 23:31:34 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
没有超纯水制备仪器，可以用哇哈哈纯净水。
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Tantantant
v2870113
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2014/6/28 9:58:19 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我以前用的是苏州产的娃哈哈
有的工作站可以 把图放在一张 你是什么仪器什么工作站
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知足常乐！
wenshaowei-2008
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2014/6/29 10:33:57 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
色谱条件：
色谱柱!BondapakC18，ID4mmX250mm，10um；
柱温40C；
流动相为乙腈-甲醇-0.6%乙酸(体积比为5：50：45）
0.8mL/min恒流洗脱
检测波长254nm

试试这个条件，这是一个朋友做过马铃薯内源激素的条件
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疯狂的麦子
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2014/7/1 10:35:09 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 三人行(jncxyy2012) 发表:
没有超纯水制备仪器，可以用哇哈哈纯净水。


哇哈哈纯净水用前要用水系滤膜过滤么？如果要的话，怎么才能大量的过滤，我看卖的滤膜都是很小的一个一个的样子，那过滤太麻烦了？
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疯狂的麦子
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2014/7/1 10:37:23 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 三人行(jncxyy2012) 发表:
没有超纯水制备仪器，可以用哇哈哈纯净水。
那哇哈哈要过水系滤膜过滤么？大量用的话怎么过滤啊，外面卖的滤膜都是很小的那种。
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疯狂的麦子
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2014/7/1 10:41:54 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 知足常乐！(wenshaowei-2008) 发表:
色谱条件：
色谱柱!BondapakC18，ID4mmX250mm，10um；
柱温40C；
流动相为乙腈-甲醇-0.6%乙酸(体积比为5：50：45）
0.8mL/min恒流洗脱
检测波长254nm

试试这个条件，这是一个朋友做过马铃薯内源激素的条件
能给我发一份么？553658540@qq.com
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三人行
jncxyy2012
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2014/7/1 10:56:51 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 疯狂的麦子(v2906572) 发表:
原文由 三人行(jncxyy2012) 发表:
没有超纯水制备仪器，可以用哇哈哈纯净水。


哇哈哈纯净水用前要用水系滤膜过滤么？如果要的话，怎么才能大量的过滤，我看卖的滤膜都是很小的一个一个的样子，那过滤太麻烦了？


现用现过滤，习惯就好了。
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三人行
jncxyy2012
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2014/7/1 10:59:23 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 疯狂的麦子(v2906572) 发表:
原文由 三人行(jncxyy2012) 发表:

没有超纯水制备仪器，可以用哇哈哈纯净水。
那哇哈哈要过水系滤膜过滤么？大量用的话怎么过滤啊，外面卖的滤膜都是很小的那种。


液相每天用纯水不会很多啊，用多少过滤多少。
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支点
zhx_fs_ln
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2014/7/1 11:02:25 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 疯狂的麦子(v2906572) 发表:
原文由 三人行(jncxyy2012) 发表:
没有超纯水制备仪器，可以用哇哈哈纯净水。
那哇哈哈要过水系滤膜过滤么？大量用的话怎么过滤啊，外面卖的滤膜都是很小的那种。
液相一般都有溶剂过滤器
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mofeng2012
mofeng2012
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2014/7/1 11:12:17 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由v2906572发表：
原文由 三人行(jncxyy2012) 发表:
没有超纯水制备仪器，可以用哇哈哈纯净水。


哇哈哈纯净水用前要用水系滤膜过滤么？如果要的话，怎么才能大量的过滤，我看卖的滤膜都是很小的一个一个的样子，那过滤太麻烦了？
一般有那种过滤装置，真空过滤
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