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主题：【第七届原创】【许愿原创】色谱峰保留时间漂移的对策

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逆天一棍
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发表于：2014/07/28 17:18:16 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
维权声明：本文为fengmo4668原创作品，本作者与仪器信息网是该作品合法使用者，该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现均属侵权违法行为，我们将追究法律责任。
一、背景：

我们的色谱柱一般都是这样处理的：下午进针，做样到半夜结束，设置自动冲洗色谱柱方法冲洗色谱柱（先用5:95的乙腈-水冲洗干净色谱柱中的缓冲盐，如果第二天没有样品要做，就用异丙醇清洗色谱柱里可能吸附的油性杂质，然后保存色谱柱；如果第二天有样品需要检验，就光洗干净盐即可，第二天也有利于色谱柱的平衡）。

色谱条件是这样的：Agilent 1260液相色谱仪，博纳艾杰尔色谱柱，Venusil XBP C18（L），4.6mm*150mm，5μm，Cat：VX951505-L，S/N：V9520515BM0106），流动相A为磷酸盐溶液（pH为7.0）-乙腈（75:25），流动相B为乙腈。0min为100%的流动相A，至40min时流动相A比例为50%，流动相B为50%，41min时调整为流动相为100%，维持4min。检测波长为240nm，进样量为10μL，流速为1ml/min。

二、问题：

这样已经坚持一段时间了，一直都好好，前两天突然发生状况了。

具体是这样：

头天的出峰情况如此：



保留时间的重现性还挺好，波动很小。

可第二天平衡好柱子后，再进样品，保留时间就有变化了：



放到一块看，差异更明显。



两者是同一根色谱柱，同一瓶流动相（没有更换），同一台仪器，不同的只是进样时间不一样。出现如此现象，到底为何呢？

三、分析

分析可能导致的原因：

1.色谱柱没有平衡好；

2.缓冲盐的通道有析出，堵塞管路，导致缓冲盐出液量不够，相当于增加了乙腈的比例，导致出峰提前；

3.混好的流动相A中的水和乙腈相分离，导致不同高度液面位置的乙腈和水的比例不同。

4.流动相B的乙腈聚合，也相当于改变了流动相的比例；

四、应对措施：

1.用70℃的水浴加热纯净水，冲洗全部4个通道，不管是有析出的盐，还是有乙腈聚合吸附，都可以有效清除；

2.更换过滤白头；

3.做完实验后，第二天用5:95的乙腈-水冲洗流动相A通道半小时，消除可能析出的盐类影响。然后再去平衡色谱柱。

五、结果

效果还不错，保留时间又回到了原来的状态。又可以顺顺利利的做实验了。
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三人行
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2014/7/28 23:35:33 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
缓冲盐的通道有析出，管路有轻微堵塞。
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dahua1981
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2014/7/29 8:36:39 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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缓冲盐的通道有析出，管路有轻微堵塞。
如果用缓冲盐的话常有的事
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ECHO007
v2769262
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2014/7/29 17:27:54 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 三人行(jncxyy2012) 发表:
缓冲盐的通道有析出，管路有轻微堵塞。


多冲洗下管路。
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三人行
jncxyy2012
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2014/7/29 17:57:29 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 ECHO007(v2769262) 发表:
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缓冲盐的通道有析出，管路有轻微堵塞。


多冲洗下管路。


用温水冲洗比较好。
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wslmpol
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2014/7/29 21:21:46 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
冒昧问一句，楼主所说的 《分析》 的第三点有可能存在么？我认为乙腈和水是混溶的，两种溶剂只要混匀之后，不管放多久都不会出现不均匀的情况，不知道对不对？
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ECHO007
v2769262
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2014/7/30 7:55:22 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 三人行(jncxyy2012) 发表:
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缓冲盐的通道有析出，管路有轻微堵塞。


多冲洗下管路。


用温水冲洗比较好。


恩
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逆天一棍
fengmo4668
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2014/7/30 13:14:23 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 三人行(jncxyy2012) 发表:
缓冲盐的通道有析出，管路有轻微堵塞。
有可能是这样的情况。
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逆天一棍
fengmo4668
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2014/7/30 13:15:15 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 dahua1981(dahua1981) 发表:
原文由 三人行(jncxyy2012) 发表:
缓冲盐的通道有析出，管路有轻微堵塞。
如果用缓冲盐的话常有的事
咨询过工程师，工程师更倾向于是乙腈聚合的原因导致的。
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逆天一棍
fengmo4668
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2014/7/30 13:15:41 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 ECHO007(v2769262) 发表:
原文由 三人行(jncxyy2012) 发表:
缓冲盐的通道有析出，管路有轻微堵塞。


多冲洗下管路。
要必须很经常的清洗。严重耽误进度啊。
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逆天一棍
fengmo4668
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2014/7/30 13:16:10 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 三人行(jncxyy2012) 发表:
原文由 ECHO007(v2769262) 发表:
原文由 三人行(jncxyy2012) 发表:
缓冲盐的通道有析出，管路有轻微堵塞。


多冲洗下管路。


用温水冲洗比较好。
工程师建议的是70℃的热水冲洗。
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