一、样品前处理方法1.1水性样品(水、饮料、果汁等)固相萃取柱:Cleanert DEHP玻璃柱,500mg/6mL,P/N:DEHP50061) 样品处理此类样品包括瓶装纯净水、矿泉水,茶、果汁和功能饮料等;某些可水溶解的固体样品可以先制成水溶液,然后全部作为待处理液,如无脂糖果。2) 固相萃取法净化活化:5mL 乙酸乙酯、5mL甲醇、5mL水上样:10mL水性样品淋洗:5mL 5%甲醇水,真空抽干20min。洗脱:加入2mL甲醇浸泡柱床约1min,再用10mL乙酸乙酯进行洗脱。检测:将洗脱液用氮气吹干后,以1mL甲醇定容,然后用液相色谱法检测。备注:此法多适用于配套液相色谱检测,当样品中邻苯二甲酸酯类的含量较低时,需要采用固相萃取富集才能检测的情况。一般来说,对于此类样品,可以采用正己烷液液萃取的办法,用gc/MS(灵敏度较高)直接检测。注:所使用乙酸乙酯必须是农残级。1.2 白酒固相萃取材料:Cleanert DEHP玻璃柱,500mg/6mL,P/N:DEHP50061) 样品制备:将白酒用去离子水稀释,使其中的乙醇的含量为5%,作为上样液;取1 mL甲醇加入19 mL去离子水,混匀,得到5%甲醇-水溶液,作为淋洗液。2) 净化用玻璃移液管分别取5 mL乙酸乙酯、5 mL甲醇,5 mL水,在重力状态下依次过柱;用玻璃移液管取100 mL上样液加到小柱上;用玻璃移液管取5 mL 5%甲醇-水溶液淋洗固相萃取柱;淋洗结束之后,开启真空泵抽20 min,抽干之后,加入2 mL甲醇浸泡柱床约1 min;用10 mL乙酸乙酯洗脱固相萃取柱,收集洗脱液。将洗脱液于35℃氮吹至干,用1 mL甲醇定容,将溶液转移至样品瓶中,进行gc/MS或HPLC检测。注:所使用乙酸乙酯必须是农残级。1.3 乳品及乳制品饮料等含蛋白基质样品固相萃取材料:Cleanert MAS-PAE,40mL玻璃散装填料(P/N:MS-PAE40)n 纯牛奶样品:样品净化:向玻璃离心管中加入2mL样品,然后加入4mL乙腈:甲基叔丁基谜(9:1,V/V),将离心管涡旋2min,最后加入Cleanert MAS-PAE填料,再将离心管涡旋振荡2min后,以7000rpm的转速离心5min,取上清液,以邻苯二甲酸酯检测专用针式过滤器过滤后,待检。n 酸奶样品:样品净化:向玻璃离心管中加入1mL酸奶和1mL去离子水,混匀,然后加入4mL乙腈:甲基叔丁基谜(9:1,V/V),将离心管涡旋2min,最后加入Cleanert MAS-PAE填料,再将离心管涡旋振荡2min后,以7000rpm的转速离心5min,取上清液,以邻苯二甲酸酯检测专用针式过滤器过滤后,待检。
1.4酱油固相萃取材料:
Cleanert MAS-PAE-C,40mL玻璃散装填料(P/N:MS-PAE40-C)样品净化:向玻璃离心管中加入2mL样品,然后加入4mL乙腈:甲基叔丁基谜(9:1,V/V),将离心管涡旋2min,最后加入Cleanert MAS-PAE-C填料,再将离心管涡旋振荡2min后,以4000rpm的转速离心5min,取上清液,以邻苯二甲酸酯检测专用针式过滤器过滤后,待检。 1.5油性样品方法一:内部方法固相萃取柱:Cleanert PAE-G玻璃柱,3g/6mL(P/N:PAE30006-G)1) 样品制备:用万分之一天平称取0.1g油,置于玻璃离心管中,然后加入3mL乙腈,涡旋2min,超声2min,以4000rpm离心2min,将上清液转移至另一玻璃管中,在40℃下以氮气吹干,加入2mL正己烷,轻轻振荡摇匀,作为待净化液。2) 固相萃取方法:活化: 5mL正己烷上样:将待净化液全部加到固相萃取柱中淋洗:用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷洗脱:用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷收集洗脱液,在40℃下以氮气吹干,加入1mL乙腈,涡旋1min,超声1min,以4000rpm离心2min,取上清液进gc/MS检测。注:所使用乙酸乙酯必须是农残级。方法二、SN/T 3147-2012固相萃取柱:Cleanert PSA玻璃柱,1g/6mL(P/N:PA00006-G)1) 样品制备称取1.0 g样品于玻璃离心管中,加入2 mL正己烷和10 mL乙腈,涡旋2 min,以4000 r/m离心2 min,转移下层清液转移至另一样品瓶中,以10 mL乙腈重复提取样品一次,合并提取液,40 ℃氮气吹至近干,加入2 mL正己烷复溶作为待净化液。2) 净化活化:将Cleanert PSA玻璃固相萃取柱用5mL丙酮、5mL正己烷活化上样:将待净化液全部加到固相萃取柱中;洗脱:用5mL 正己烷,然后用5mL 4%丙酮—正己烷溶剂洗脱,合并洗脱液收集洗脱液,在40℃下以氮气吹干,加入1mL乙腈溶解,进HPLC检测。1.6 复杂基质样品(如方便面填料包)固相萃取柱:
Cleanert PAE-C玻璃柱,1g/6mL(P/N:PAE30006-C)1) 样品制备:用万分之一天平取0.5g调料,置于玻璃样品瓶中,加入3mL乙腈/甲基叔丁基醚(9:1,v/v),涡旋2min,超声2min,以4000r/m离心2min,将上清液转移至另一干净样品瓶中,往装调料的样品瓶中再加入3mL乙腈/甲基叔丁基醚(9:1,v/v),涡旋2min,超声2min,以4000r/m离心2min,将上清液合并,于40℃氮气吹干,加入1mL正己烷,摇匀,作为待净化液。2) 样品净化:活化:5mL正己烷上样:全部待净化液淋洗: 10mL 1%乙酸乙酯/正己烷(v/v)洗脱:5mL乙酸乙酯:正己烷(50:50,v/v)将洗脱液于40℃下氮气吹干,加入1mL乙腈,涡旋混合1min,超声1min,4000r/m离心3min,转移上清液至进样样品瓶中,待检测。注:所使用乙酸乙酯必须是农残级。二、检测方法2.1 高效液相色谱法色谱条件色谱柱:Venusil XBP C18-L ,4.6×250 mm,5 μm,150Å(P/N:VX952505-L);流动相:A相-水,B相-甲醇:乙腈=50:50 (v/v)流速:1.0 mL/min;波长:242 nm进样量:5 μL(样品浓度100ppm),50μL(样品浓度10ppm);溶 剂:正己烷/流动相A+流动相B(40+60);柱 温:30℃梯度洗脱:见表1表1. 液相色谱梯度洗脱条件
时间/min | A/% | B/% |
0 | 60 | 40 |
2 | 50 | 50 |
10 | 40 | 60 |
12 | 30 | 70 |
20 | 30 | 70 |
31 | 0 | 100 |
40 | 0 | 100 |
40.01 | 60 | 40 |
图1. 16种邻苯二甲酸酯类标准品HPLC色谱图(样品浓度为25 ppm)(邻苯二甲酸二甲酯DMP,邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯DMEP,邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP,邻苯二甲酸二乙酯DEP,邻苯二甲酸二苯酯,邻苯二甲酸丁苄酯BBP,邻苯二甲酸二异丁酯DIBP,邻苯二甲酸二正丁酯DBP,邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP,邻苯二甲酸二戊酯DPP,邻苯二甲酸二环己酯DCHP,邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯BMPP,邻苯二甲酸二己酯DHXP,邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯DEHP,邻苯二甲酸二辛酯DNOP,邻苯二甲酸二壬酯DNP)
2.2 气相色谱质谱法1)气相色谱条件色谱柱:DA-5MS(30m*0.25mm*0.25μm);进样口:250℃,不分流进样;进样量:1 μL;程序升温:50℃(1 min)20℃/min 220℃(1 min)5℃/min 280℃(4 min);流速:1 mL/min2)质谱条件接口温度:280℃;电离方式:EI;电离能量:70 eV;溶剂延迟:7 min;监测方式:SIM模式,监测离子见表2。表2. 16种邻苯二甲酸酯类化合物定量离子及定性离子
编号 | 保留时间/min | 中文名称 | 英文缩写 | 定量离子 | 辅助定性离子 |
1 | 8.258 | 邻苯二甲酸二甲酯 | DMP | 163 | 77 |
2 | 9.128 | 邻苯二甲酸二乙酯 | DEP | 149 | 177 |
3 | 10.889 | 邻苯二甲酸二异丁酯 | DIBP | 149 | 223 |
4 | 11.637 | 邻苯二甲酸二丁酯 | DBP | 149 | 223 |
5 | 11.97 | 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 | DMEP | 59 | 149、193 |
6 | 12.728 | 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 | BMPP | 149 | 251 |
7 | 13.051 | 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 | DEEP | 45 | 72 |
8 | 13.418 | 邻苯二甲酸二戊酯 | DPP | 149 | 237 |
9 | 15.568 | 邻苯二甲酸二己酯 | DHXP | 149 | 104、76 |
10 | 15.726 | 邻苯二甲酸丁基苄基酯 | BBP | 149 | 91 |
11 | 17.169 | 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 | DBEP | 149 | 223 |
12 | 17.843 | 邻苯二甲酸二环己酯 | DCHP | 149 | 167 |
13 | 18.073 | 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 | DEHP | 149 | 167 |
14 | 18.207 | 邻苯二甲酸二苯酯 | — | 225 | 77 |
15 | 20.481 | 邻苯二甲酸二正辛酯 | DNOP | 149 | 279 |
16 | 23.023 | 邻苯二甲酸二壬酯 | DNP | 149 | 57、71 |
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图2. 白酒中16种邻苯二甲酸酯类样品加标100 ppb gc-MS谱图
(邻苯二甲酸二甲酯DMP,邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯DMEP,邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP,邻苯二甲酸二乙酯DEP,邻苯二甲酸二苯酯,邻苯二甲酸丁苄酯BBP,邻苯二甲酸二异丁酯DIBP,邻苯二甲酸二正丁酯DBP,邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP,邻苯二甲酸二戊酯DPP,邻苯二甲酸二环己酯DCHP,邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯BMPP,邻苯二甲酸二己酯DHXP,邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯DEHP,邻苯二甲酸二辛酯DNOP,邻苯二甲酸二壬酯DNP) 三、订货信息产品名称 | 订货号 | 说明 | 规格 | 包装(支/盒) | 价格(元) |
Cleanert PAE 增塑剂系列专用柱 | DEHP5006 | 用于水、饮料等样品 | 500mg/6mL | 30 | 1140 |
MS-PAE40 | 乳品及乳制品饮料等 | 40mL玻璃样品瓶 | 15 | 300 |
MS-PAE40-C | 酱油等复杂水性样品 | 40mL玻璃样品瓶 | 15 | 390 |
PAE30006-G | 油性样品 | 3g/6mL | 30 | 1200 |
PAE30006-C | 复杂油性样品如方便面调料包、火锅底料等 | 3g/6mL | 30 | 1440 |
PA0006-G | 适用于SN/T 3147-2012 | 1g/6mL | 30 | 1380 |
邻苯二甲酸酯检测专用针式过滤器 | — | 适用于增塑剂类 | 定制 | — | 询价 |
乙酸乙酯 | 100-4 | 农残级 | 4L/瓶 | 4*4L/箱 | 1600 |
附注:本系列方法里所涉及的有机溶剂,必须要达到色谱纯级别以上,而乙酸乙酯需要使用更高级的农残级。所涉及的容器和移液器,必须是洁净的玻璃材质所制。