原文由 enslyde(enslyde) 发表:
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条件不足,无法分析。
怎么这么说呢:楼主一没给柱子型号,二没给流速,只是说了压力很高,怀疑“堵了”,但是12000psi的压力怎么来的没有说。
我们这用UPLC的经验来看,(甲醇:水=40:60)>纯水>乙腈、水。
甲醇和升,等比例混合的时候压力最大,接近纯水的1.3倍,是纯乙腈的4倍以上。乙腈水混合的时候压力随着乙腈的比例提高而降低。水混合后压力会有比较大的提
再给个参考压力(放假凭记忆),一般说0.4ml/min流速50mm的纯乙腈压力是1000到2000psi之间,纯甲醇是2000到3000psi,纯水接近5000psi。如果是1:1的甲醇水,压力接近7000psi。
如果放在100mm的柱子上,这个流速下用甲醇水会接近14000psi。用150mm的柱子,则会超过压力上限。
柱子 是 C18柱,2.1*50mm;1.7微米;0.2ml 纯甲醇冲5-6Kpsi;0.2ml 纯乙腈冲 4-5K psi;0.2ml 40:60甲醇:水,8-9K psi;0.3ml 40:60 甲醇 水,压力再11000-12000psi;我测得卡马西平标液,用0.4ml流量的40:60=甲醇:水,压力很快就达15000psi上限,报警停机了。我洗脱了好几天,偶尔压力下来了,感觉低了1-2Kpsi,一上样品又崩溃了 压力立马飙升报警。不知道哪里出问题了。我初学液相,承蒙指点!
把参数一说,问题就会比较明显了。
柱子压力偏高了很多,而样品和流动相的过滤则可能是引起柱子堵的原因。
上机样品和校准样应该是有用一次性注射器打过0.22滤膜吧?流动相尤其是含水含盐的流动相也是一定要抽滤的。不然柱子压力会越走越高,严重的流动相问题更可能会损坏仪器。
具体可以参考UPLC H-class的操作规程,相信你会清晰很多。