UPLC-MS/MS法测定水果中复硝酚钠残留量

本文通过优化质谱参数和色谱条件，考察流动相、提取方法等因素，建立了UPLC—MS／MS测定水果中复硝酚钠残留的分析方法。该方法操作简单，快速，方法灵敏度、回收率及重现性均令人满意。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

对硝基酚钠，邻硝基酚钠和5-硝基愈创木酚钠标准品纯度≥98%；乙腈，甲醇为色谱纯；实验室用水为超纯水；所用试剂除特殊说明外均为分析纯。

1.2 仪器

UPLC-MS/MS 超高效液相色谱串联质谱仪(QuattroPremier XE) 美国沃特世公司，配电喷雾离子源；电子分析天平梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司；

1.3 标准溶液的配制

准确称取对硝基酚钠，邻硝基酚钠和5-硝基愈创木酚钠标准品(精确至0.1mg)，分别用水溶解制得标准储备液。取各标准储备液适量，用水稀释制得混合标准工作溶液，其中对硝基酚钠、5-硝基愈创木酚钠浓度配制成0.00,0.05，0.10，0.20,0.50,1.00,2.00mg／L，邻硝基酚钠配制成0.00,2.5，5.0，10.0，25.0，50.0,100.0mg/L。该溶液于4℃冰箱内保存。

1.4 样品处理

称取已匀浆的样品5 g (精确到0.0001 g)，放入具塞150mL碘量瓶内，加人甲醇提取液20mL，盖上玻璃塞，超声振荡5min，过滤，滤渣加入10mL甲醇提取液，超声振荡5min，过滤，滤渣加入lOmL甲醇提取液，超声振荡5min，残渣弃去，合并3次提取液，在提取液中加入10g无水硫酸钠脱水，然后用无水硫酸钠过滤，并用20mL甲醇冲洗，收集滤液在旋转蒸发仪上45℃减压蒸发浓缩近干，用水定容至5mL，过0.22μm滤膜，待测。

1．5 仪器操作条件

1.5.1色谱条件

色谱柱：Waters ACQUITY UPLC HSS T3 (4.6 mm ×100mm，1.8 μm)；

流动相A：甲醇

流动相B：10 mmol／L乙酸铵水溶液。

等度洗脱程序：流动相A:60% ;流动相B：40% ；进样量：5 μL；流速：0.2 mL／min；柱温：30℃ 。

1.5.2质谱参数

离子源：电喷雾离子源(ESI)，采用ESI^- 模式；扫描方式：多反应监测(MRM)；毛细管电压（Capillary）：3.5kV；锥孔电压（Cone）：30V；离子源温度(SourceTemp)：110℃；脱溶剂气温度（Desolvation Temp）：450℃；脱溶剂气流量：450L/hr；锥孔气流量：50L/hr；碰撞气流量：0.12ml/min；驻留时间：0.2 S。三种物质的保留时间、母离子、子离子、锥孔电压、碰撞电压和驻留时间见表1。三种物质的总离子流图见图1，5-硝基愈创木酚钠总离子流图和定性离子对图见图2，对硝基苯酚钠和邻硝基苯酚钠总离子流图和定性离子对图见图3.

表1 三种物质的保留时间、母离子、子离子、锥孔电压、碰撞电压和驻留时间

化合物	保留时间 min	母离子(m/z)	子离子 (m/z)	锥孔电压(eV)	碰撞电压（eV）	驻留时间（S）
5-硝基愈创木酚钠	2.21	168.15	152.97	25	15	0.2
5-硝基愈创木酚钠	2.21	168.15	123.12	25	25	0.2
对硝基酚钠	2.23	138.15	108.12	30	15	0.2
对硝基酚钠	2.23	138.15	92.18	30	25	0.2
邻硝基酚钠	2.83	138.15	108.12	30	15	0.2
邻硝基酚钠	2.83	138.15	92.18	30	25	0.2

图1 三种物质的总离子流图

图2 5-硝基愈创木酚钠总离子流图和定性离子对图

图3 对硝基苯酚钠和邻硝基苯酚钠总离子流图和定性离子对图

2 结果与讨论

2．1 质谱条件的优化

首先采用100ng／mL的对硝基酚钠、邻硝基酚钠和5-硝基愈创木酚钠标准溶液在负离子模式下进行母离子全扫描，试验不同参数如碎裂电压、碰撞电压对检测的影响，并进行相应的离子扫描。通过优化各个参数，得到最佳的条件，母离子，定量离子和定性离子见表1。

2．2 样品提取方法的选择

复硝酚钠的三个成分均易溶于水的，在水果样品中存在大量水分，单纯的有机溶剂并不容易直接从水相中将其提取出来，通过有机相和水相分层萃取的方式进行提取，水相中难免会有残留损失，回收率偏低。本文采用甲醇和水共同分离，收集提取液，通过无水硫酸钠脱水处理之后浓缩的方式，实验证明该方法提取效率高，操作简单。

2．3 回收率与精密度试验

用所建方法对苹果、梨样品进行测定，样品中均未检出复硝基酚钠残留。在苹果和梨样品中添加复硝基酚钠标准溶液为0.1～5.0mg／kg，进行加标回收试验。结果见表3。有表3可知，对硝基酚钠的回收率为83.0％～93.4％，邻硝基酚钠的回收率为81.0％～87.4％,5-硝愈创木酚钠的回收率为83.0％～91.8％，测定结果的相对标准偏差均小于7%，表明所建方法的精密度和准确度较高。

表3 回收率与精密度试验结果（n=6）

2.4 工作曲线方程和检出限

在1.4仪器工作条件下，对1.2中系列混合标准工作溶液进行测定，以色谱峰面积（Y）对待测组分的质量浓度（X）进行线性回归，对硝基酚钠线性方程是Y=51450.8X+123.4；5-硝基愈创木酚钠的线性方程是Y=32104.9X+79.9；邻硝基酚钠的线性方程是Y=436.8X+93.4。分别以3倍的信噪比对应的含量，通过计算得出方法检出限，对硝基酚钠和5-硝基愈创木酚钠均为0.01mg/kg；邻硝基酚钠的检出限为0.5mg/kg。

3 结论

本文采用甲醇提取的方式，经过无水硫酸钠脱水处理后浓缩，UPLC-MS/MS检测，同时测定水果中的复硝酚钠三种成分的残留量。该方法简单，快速，准确，满足残留量分析。

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