主题:【讨论】人血白蛋白多聚体测定为何除以2

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人血白蛋白多聚体测定法



本法系用分子排阻色谱法测定人血白蛋白多聚体含量。

照分子排阻色谱法(附录Ⅲ D)测定。

色谱条件与系统适用性试验    用亲水硅胶高效体积排阻色谱柱(SEC,排阻极限300kD,粒度10μm),柱直径7.5mm,长60cm;以含1%异丙醇的pH7.0 0.2mol/L磷酸盐缓冲液[取0.5mol/L磷酸二氢钠200ml、0.5mol/L磷酸氢二钠420ml、异丙醇15.5ml及水914.5ml,混匀]为流动相;检测波长为280nm ;流速为每分钟0.6ml。取每1ml含蛋白质为12mg 的人血白蛋白溶液20μl,注入色谱柱,记录色谱图,人血白蛋白单体峰与二聚体峰间的分离度应大于1.5,拖尾因子按人血白蛋白单体峰计算应为0.95~1.40。

测定法    取供试品适量,用流动相稀释成每1ml约含蛋白质12mg的溶液,取20μl,注入色谱柱,记录色谱图60分钟(色谱柱长60cm
按面积归一法计算,色谱图中未保留(全排阻)峰的含量(%)除以2,即为人血白蛋白多聚体含量
请教:为何除以2呢?很奇怪呀
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赛克诗
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略高深啊。。新手学习中。。。
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bigalice100
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有水有渝
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取定量的人血白蛋白单体峰与二聚体,分别看一下等浓度下的峰面积大小,是不是二聚体的峰面积是单体的4倍
Insm_4ebbeb89
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Ins_ab7292a9
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白蛋白多聚体检测时,通常需要将检测结果除以2,这是因为多聚体检测方法(如凝胶过滤层析法)测得的数值是多聚体的总浓度,而不是单体(单体指的是非聚合状态的白蛋白分子)。由于多聚体是由两个或多个白蛋白单体结合而成的,所以为了得到准确的单体浓度,需要将多聚体浓度除以2,从而得到单体的浓度。

这个过程假设了所有的白蛋白单体都以相同的方式聚合形成多聚体,因此平均每个多聚体包含两个单体。

这是搜索来的结果,多聚体的含量检测疑问更大了,图谱中有多聚、二聚和单体的峰,多聚解释成2聚,不合理。
Ins_ab7292a9
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应该考虑多聚体在280nm处的吸光度值是否为单体的2倍,实验没做过,这样考虑的话,二聚的含量也需要考虑计算方法了
Ins_ab7292a9
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原文由 Ins_ab7292a9(Ins_ab7292a9) 发表:
应该考虑多聚体在280nm处的吸光度值是否为单体的2倍,实验没做过,这样考虑的话,二聚的含量也需要考虑计算方法了
订正一下,应考虑蛋白浓度。实验设计为,分子排阻法SEC-HPLC双波长测定280nm和214nm处的峰面积,以214nm处的峰面积为蛋白含量,以280nm处的为检测结果,作比较,考察2个结果的比值,聚体的比值应为单体的2倍。
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