关于色谱柱的再生和修补论坛里已有很多类似的好帖,他们很详细的说明了色谱柱污染原因,再生方法以及如何修补,在这里我只是通过学习了他们的帖子,对于解决色谱柱的污染 再生 以及修补做一个实例分享,以便于有更多出现类似情况的盆友能够去解决实际问题。
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先看一下污染后的色谱图(黑色) 再生后的色谱图(绿色) 修补后的色谱图(红色):
色谱柱的污染(黑色色谱图)现象:峰高降低,缝宽增加,分离度降低,严重拖尾,影响检测。
采取措施:
1:用色谱甲醇做流动相,以1.00ml/min的流速,反向(只适用于色谱柱两端封口一致的色谱柱)冲洗一小时,不接检测器。
2:用异丙醇,以0.3ml/min的流速,反向冲洗三小时
3:再用甲醇,以1.00ml/min的流速,反向冲洗30分钟。
4:连接检测器,正向连接色谱柱,用流动性过渡,
5:基线平稳后,进样。进样色谱图(上图中绿色色谱图)
这时,色谱图还是有点拖尾,卸开色谱柱进口螺帽,看污染情况,如下图:(柱头填料污染) 筛板变黑,污染,如下图:采取措施:
1:挖去柱头污染的填料,大约1.5mm,挖去的污染填料如下图:2:用同种填料,湿法填平挖去的柱头填料,筛板用异丙醇超声15分钟,再用水超声5分钟,用滤纸擦干,上好柱头螺丝。
3:流动相冲洗30分钟,不连接检测器。
4:连接检测器,过渡平衡,进样(如图:红色色谱图)
结论:根据色谱柱出现柱效降低,分离效果不好,严重拖尾,影响正常检测的情况,进行了反向冲洗,以及修补,效果还是可以的,不免盆友见笑,说实在的这一根色谱柱在三个月以前已经进行了一次修补,现在是第二次修补,通过两次修补的色谱柱还能使用多久呢?让我们拭目以待吧!
再者:对于使用效果不好的色谱柱,要根据情况作相应的处理,如果通过清洗能解决问题的一般不要修补,清洗不能达到使用效果的再进行修补。哈哈......这句名言已经有人说过了,我只是再背一遍哦
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