有时候接到客户电话咨询,我现在分离某某化合物分离效果不好了,原来分得挺好的,现在咋就分不了了,是色谱柱污染还是仪器问题呢?
遇到这种情况,我们首先对色谱柱进行柱效测试,不同品牌色谱柱对柱效测试的方面略有不同,下面以Dikma色谱柱测柱效为例来说明如何测柱效:
分别精密称取下列标准品,溶解在15ml乙腈:水=65:35的溶液中。
1、尿嘧啶:0.0015g
2、苯甲酸甲酯:30ul
3、甲苯:200ul
4、萘:0.025g
然后,按照以下色谱条件进行HPLC分析
色谱柱如图所示
规格250 × 4.6 mm
流动相乙腈: 水 = 65:35
流速1.0 mL/min
柱温30 oC
检测器UV 254 nm
进样量2.0 μL
样品
1. 尿嘧啶
2. 苯甲酸甲酯
3. 甲苯
4. 萘