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主题：【原创】HPLC色谱柱的冲洗和保养——小细节，长寿命～

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happytiankong1
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发表于：2015/05/26 15:03:24 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我们在对HPLC色谱柱进行冲洗时，需注意以下事项，这样可以较好的保护色谱柱，尽可能延长色谱柱使用时间。
• 当使用了缓冲液或含盐的流动相，实验完成后应用10%的甲醇水溶液冲洗30分钟，洗掉色谱柱中的盐，再用甲醇冲洗30分钟。注意：不能用纯水冲洗柱子，应该在水中加入至少10%的甲醇，防止将填料冲塌陷
• 一些保留强的杂质必须要洗脱出去
• 如色谱柱要长时间保存，可以储存于纯甲醇或乙腈中，并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。储存的温度最好是室温

• 依次采用不同极性溶剂冲洗色谱柱，每次20-30倍的色谱柱体积
    ——反相色谱柱：10%甲醇水溶液—乙腈—异丙醇—甲醇—10%甲醇水溶液
    ——正相色谱柱：正己烷—三氯甲烷—乙酸乙酯—异丙醇—甲醇—异丙醇—乙酸乙酯—三氯甲烷—正己烷
需要注意的是，再生处理正相色谱柱时，所使用的试剂需要严格除水

对于生物类样品污染的色谱柱：
如果生物材料血浆或血清样品注入色谱柱，在大多数情况下，纯有机溶剂（如乙腈或者甲醇）并不能溶解肽和蛋白质，用他们清洗色谱柱是无效的。然而，有时使用有机溶剂与缓冲物、酸或离子对试剂的混合物却是有效的。

对于HPLC反相柱清洗蛋白质类物质可用下述组成的溶剂系统:
1%的乙酸水溶液（加入5%的甲醇）
1%的三氟乙酸水溶液（加入5%的甲醇）
0.1%四氢呋喃/正丙醇=40/60（需降低流速）

或者将色谱柱反转，与检测器断开，用5倍柱体积的100%异丙醇清洗，然后使用3~5倍柱体积的二氯甲烷，3~5倍柱体积的异丙醇，最后再返回原始的溶剂体系（此操作仅限当色谱柱寿命快到时使用）。
如果这样处理后柱子还没有好转，说明柱子的寿命已经到了，该更换新的色谱柱了。
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2015/5/26 22:24:06 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
冲洗柱子很少用纯水冲洗，都是有机相跟水相按照比例冲洗
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2015/5/26 23:15:26 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 20071940xu(20071940xu) 发表:
冲洗柱子很少用纯水冲洗，都是有机相跟水相按照比例冲洗
除了标明可以用纯水冲洗的以外，一般柱子不宜用纯水冲洗，至少应该用5-10%的有机相混合水。
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夏天的雪
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2015/5/27 9:57:30 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
用纯水短时间内冲洗色谱柱，通常不会对色谱柱造成较大的损伤，但如果长时间用水冲洗色谱柱则可能引起固定相流失和相塌陷现象，所以若非必要请尽量避免用纯水冲洗色谱柱，建议在水中加入一定量的甲醇或乙腈进行冲洗，通常水的含量<90%不会对色谱柱造成任何影响。
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happytiankong1
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2015/5/27 14:08:24 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 20071940xu(20071940xu) 发表:
冲洗柱子很少用纯水冲洗，都是有机相跟水相按照比例冲洗
这个习惯很好，这样对色谱柱的维护比较好～
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999youran
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2015/5/27 16:10:59 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
好的使用习惯能大大延长色谱柱的寿命
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千层峰
jxyan
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2015/5/27 17:25:14 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
色谱柱，使用保养得当，寿命可以长达3年。。
使用不当，，一个样品就废了。。
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20071940xu
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2015/5/27 22:01:04 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 wsy18(wsy18) 发表:
除了标明可以用纯水冲洗的以外，一般柱子不宜用纯水冲洗，至少应该用5-10%的有机相混合水。
是的 最少也要有百分之几的有机相
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20071940xu
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2015/5/27 22:01:49 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 happytiankong1(happytiankong1) 发表:
这个习惯很好，这样对色谱柱的维护比较好～
是的 色谱柱的使用寿命也会增加
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wsy18
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2015/5/27 22:09:01 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 20071940xu(20071940xu) 发表:
是的 最少也要有百分之几的有机相
所以在没得到确定可以用纯水冲柱的资料前应该慎重，还是用水与有机溶剂的混合液冲柱。
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20071940xu
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2015/5/27 22:13:12 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 wsy18(wsy18) 发表:
所以在没得到确定可以用纯水冲柱的资料前应该慎重，还是用水与有机溶剂的混合液冲柱。
是的  用百分之几的有机相冲洗柱子可以防止细菌滋生
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