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凝胶色谱（GPC）
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主题：[求助]关于串联凝胶色谱柱顺序问题。

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max26495
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发表于：2006/10/17 23:16:00 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
该帖子已被lxdongzi2003设置为精华；
我们的一个产品需要几根凝胶柱串联,Waters Ultrohydrogel 1000,500,250。这几根不同的色谱柱测量的分子量的范围有不同,1000的柱测的分子量范围最大。
我们的产品分子量大概在23000左右，但药典要求10%大分子部分和10%小分子部分，分别是160000和4800，于是用的是这三根柱的串联。
今天很郁闷，把柱子接反了（流动相方向与柱流相没反)，但应该先接1000的柱，最后250的柱，我先接了250的，最后接了1000的，被狠批一顿。
但从柱压，出峰时间来看好像似乎没什么问题，不知测分子量时要先经大分子量的柱子的说法是否准确，请高手赐教。
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2006/10/20 13:33:00 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我们刚开始使用时，也遇到同样的问题。了解过相关的使用方式和有经验的人士，大都认为连接顺序一般是从大分子量到小分子量。
后来和一些仪器维修工程师讨论过，也没有得到一个肯定结论。所以我认为从小到大接也不是不行，只要柱子的方向没错就可以。具体对分析结果的影响就更小了，主要是由标准曲线，结果一般没有太大差别。
有一点值得说的就是柱子的方向问题，一般使用是按照柱子的标志方向来用，是因为柱子在制作时是按照一定的方向在一定的压力下装填的。所以要按照指定的方向使用，但这并不说明就不能反接，有时柱子脏了还要反接冲洗呢。当然就要在较低的流速和压力下冲洗，是为了保证不要把柱子里的填料冲送动了。
一家之言，仅供参考。
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wspwsp2003
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2006/10/24 15:29:00 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
从现象上看问题不大，但凝胶色谱的理论是建立在分离的基础上，也就是分子量从大到小的分子主义分离的，柱子的填料也是如此，分离都不同的柱子压力不同，使用错误会使柱子失效
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chris
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2006/10/25 10:09:00 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我们曾经从小到大使用了一段时间好像与从大到小联接没有压力差别。
至于柱子失效，我想应该是用错误的柱子分析了错误的物质引起的吧，和柱子的连接顺序有关吗？
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Last edit by wyxwyx
qiqikang
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2006/12/7 12:54:00 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我们的产品分子量大概在23000左右，但药典要求10%大分子部分和10%小分子部分，分别是160000和4800，于是用的是这三根柱的串联。
 

是什么意思？10%的要求是什么意思？谢谢。能具体帮我说一下吗？qiqikang@sohu.com
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tianru的爸爸
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2006/12/7 13:23:00 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
一般这个10%是指重量百分比，就是说大分子部分和小分子部分最多可以有10%的重量比。
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Last edit by mcds
xieqinghong
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2006/12/11 10:21:00 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
柱子的接法是先大分子量的，再接小分子量的，这样可以提高柱子的使用寿命，因为测小分子量的柱子里的填料颗粒较小，较脆弱，在高流速冲击下容易变形，故放在后面较好，（个人经验）
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bonly10
penglei_08
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2011/7/30 19:41:27 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
觉得楼上的观点有点靠谱。
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kemp
keming_he
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2011/8/4 18:42:04 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
使用混床柱就不用担心这个问题。
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二头
ertou24sui
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2011/8/5 14:21:28 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 kemp(keming_he) 发表:
使用混床柱就不用担心这个问题。


能具体解释一下吗？
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ydzcy
ydzcy
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2011/12/13 21:28:16 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
混床的柱子分离度不够,一般测量的结果会差一些
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手机版： [求助]关于串联凝胶色谱柱顺序问题。
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