保留因子(k)保留因子反应了色谱分离能力,等度洗脱的计算公式为:
k=(t
R-t
0)/t
0t
R:保留时间
t
0:死时间
对于一个稳定的方法,保留因子的范围为2<k<20,k<2意味着出峰时间早,容易受到干扰,k>20意味着出峰时间晚,峰会过宽
2死时间(t0)死时间是物质不被柱子保留所运行的时间
t
0=Vm/F
Vm= 0.5 L dc2
Vm:死体积
F:流速(ml/min)
L: 柱子长度(cm)
dc:柱子直径(cm)
3三倍法则在等度洗脱中,有机相比例每变化10%,保留因子将变化三倍
在方法开发的时候,可以非常有效的去预估保留时间
4梯度陡度(Gs)梯度洗脱的保留因子与等度的计算方式不一样
Gs:梯度陡度,
F:流速(m
g/l),ΔΦ:溶剂变化比例(5%-95% B,那么值就是90 )
tG:梯度时间(min)
Vm:柱体积(扣除了调料占据的空间)
5理论塔板数(N)理论塔板数是一个反映柱效的关键参数,其计算过程如下:
N=3000L/dp
L: 柱子长度(cm)
dp:柱子填料的径度(um)
看完这个公式,你明白了为什么150mm*2.1mm,5um和50mm*2.1mm,1.8um的柱效是一样的吗?
6柱子温度和保留时间柱温每变化1 °C ,保留会发生2%的变化,如果变化5°C,保留时间就会变化10%,所以切记安装完柱子后,合上柱温箱。