主题：【原创】食品中罂粟壳生物碱成分残留量的测定 (LC-MS/MS法)

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博纳艾杰尔

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发表于：2016/01/22 15:42:43 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

【事件背景】2016年1月晚，据新华网报道，近期国家食品药品监督管理总局在组织开展打击食品违法添加执法行动中，发现35家餐饮服务单位经营的食品中含有罂粟碱、吗啡、可待因、那可丁、蒂巴因等罂粟壳成分，存在涉嫌违法添加行为。
罂粟壳俗称大烟，罂粟科植物罂粟的干燥果壳，含有吗啡、可待因、罂粟碱、那可丁、蒂巴因等20多种活性生物碱。这些生物碱具有一定的药用价值，但其副作用亦不可低估。罂粟壳的生物碱能使人体产生快感，处于一种特殊的愉悦状态，并逐渐产生依赖性进而成瘾。不法分子正是利用这一点招揽回头客，在食品中非法掺入罂粟壳或其粉碎物、浸提物，诱发食客上瘾，具有潜在的吸食毒品的倾向，社会危害很大。
博纳艾杰尔早在2014年已经将成熟的“食品中罂粟壳生物碱成分残留量的测定 ([url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp]LC-MS/MS法)”方法编纂入《食品安全解决方案》，以供探讨。考虑到食品中香料成分的多样性，而且这些香料也有可能给罂粟壳残留成分的检测带来干扰。文中采用QuChERS-HPLC法建立一种快速、灵敏、特异的检测方法定量测定罂粟壳的生物碱成分。
(1) 样品提取
称取2g试样(精确至0.01g)于50mL聚四氟乙烯具塞离心管中，加入5mL水，混匀，加入15mL乙腈提取，再加入MS-MG5052提取管中提取，振荡1 min后放入离心机中，离心1min(5000r/min)，取出后待净化。
(2) 净化
2.1 乙二胺-N-丙基硅烷(PSA)净化法
用1mL微量移液器将上述的上清液1mL移入MS-PA0252净化管中，涡旋混合器涡旋1min，以5000r/min离心1min，移取上清液于进样小瓶中。
2.2 C18小柱净化法
吸取上述的上清液通过C18小柱，收集适量洗脱液至进样器小瓶中。
在实际操作时，根据样品中色素的含量选择不同的净化方式，每一净化方法对应各自的基质空白和加样样品。
(3) 检测条件
3.1 液相色谱条件
色谱柱：Venusil HILIC 色谱柱 2.1mm×100 mm，3μm
流动相： A：0.1%甲酸乙腈；B：100 mmol/L甲酸铵水溶液-乙腈(体积比为1：1，以甲酸调节pH=3.0)
流动相按表1进行梯度洗脱；流速：0.3mL/min；进样体积：1μL。
表1 流动相的梯度洗脱程序(%):

时间(min)	流动相A	流动相B
0.00～0.30	90	10
0.31～2.50	80	20
2.51～5.00	90	10

3.2 质谱条件
经过对毛细管出口去簇电压(DP)、碰撞池能量(CE)等质谱参数的优化，最终确定吗啡、可待因、罂粟碱、那可丁、蒂巴因质谱条件，见表2。
表2 吗啡、可待因、罂粟碱、那可丁、蒂巴因检测的质谱参数:

			定量离子		定性离子
生物碱	去簇电压(V)	母离子相对分子质量	相对分子质量	碰撞能量(V)	相对分子质量	碰撞能量(V)
那可丁	95	414.4	220.5	30	353.3	34
罂粟碱	92	340.4	202.2	38	171.1	49
蒂巴因	52	312.3	58.3	38	249.1	22
可待因	90	300.4	215.2	34	165.4	55
吗啡	97	286	181.3	50	165.3	50

(4) 结果:
图1 从上至下分别为：重庆鸡公褒酱样品中吗啡、罂粟碱、蒂巴因、可待因、那可丁的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp]LC-MS-MS-MRM色谱图:

4.1 线性范围、回归方程和检出限:
表3 5 种罂粟壳生物碱成分[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp]LC-MS-MS 法的线性范围、回归方程和检出限:

生物碱	线性范围(ng/mL)	回归方程	相关系数	检出限(ng/mL)
吗啡	1～20	y=1.61×103x＋431	0.9999	1.3
磷酸可待因	1～20	y=4.75×103x＋0.409	0.9999	1.3
盐酸罂粟碱	1～20	y=1.18×105x＋1.17×105	0.9982	0.7
那可丁	1～20	y=3.44×104x＋1.17×104	0.9992	0.7
蒂巴因	1～20	y=6.68×104x＋3.82×104	0.9992	1.3

表3可见，在1～20ng/mL范围内，吗啡、可待因、罂粟碱、那可丁、蒂巴因在线性关系良好，r>0.999，检出限分别为1.3ng/mL、1.3ng/mL、0.7ng/mL、0.7ng/mL、1.3ng/mL。
4.1 线性范围、回归方程和检出限
4.2 加标回收试验
向沙茶酱(未检出吗啡、可待因、罂粟碱、那可丁、蒂巴因)中分别加入低(20μg/kg)、中(50μg/kg)、高(100μg/kg)水平的吗啡、可待因、罂粟碱、那可丁、蒂巴因标准品进行加标回收试验，结果见表4。
表4 火锅食品中的罂粟壳生物碱成分残留[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp]LC-MS-MS 法的加标回收试验(n=6):

	低水平加		中水平加		高水平加标
生物碱	平均回收率(%)	RSD(%)	平均回收率(%)	RSD(%)	平均回收率(%)	RSD(%)
吗啡	75.6	1.6	80.6	2.3	78.8	1.2
可待因	78.2	2.1	76.6	1.5	76.9	2.3
罂粟碱	89.3	1	95.7	0.8	90.6	0.5
那可丁	80.5	1.3	73.1	1	76.8	1.9
蒂巴因	76.8	0.7	81.9	1.1	83.3	1.3

表4可见，该方法的平均回收率为73.1%～95.7%，RSD为0.5%～2.3%。
(5) 订货信息:

产品名称	规格包装	订货号
样品提取管(50mL)	50支/pk	MS-MG5052
样品净化管(2mL)	50支/pk	MS-PA0252
Venusil HILIC 色谱柱	2.1mm×100 mm，3μm	VH931002-0
针式过滤器(Nylon)	0.22μm,直径13mm,200/pk	AS021320
一次性无针头注射器	5mL, 100/pk	ZSQ-5ML
1.5mL样品瓶	短螺纹透明带书写32×11.6mm, 100/pk	1109-0519
1.5mL样品瓶盖	9 mm中心孔蓝盖，红色橡胶/米色PTFE隔垫,45．Shore A 1.0mm,100/pk	0915-1819
乙腈	4×4L/箱	AH015-4