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主题：【求助】HPLC测定兽药（恩诺沙星），色谱柱变短了，怎么不出峰呢？

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yilishanshan

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发表于：2016/03/20 22:03:30 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

做兽药（恩诺沙星）残留量检测，高效液相色谱-荧光检测，国标方法是用色谱柱C18 4.6×250mm，5μm，流动相：乙腈-水=18:82，流速0.8mL/min
恩诺沙星的保留时间在16min左右。

实验室没有长柱子，我用的是C18 4.6×100mm，3.5μm。流动相：乙腈-水=20:80，流速1mL/min。进了一针恩诺沙星对照品，3min左右出个峰，峰型也不太好，感觉和溶剂峰差不多。不确定是不是恩诺沙星，但之后跑了1个小时都没东西出来。
之后又进个对照，条件改成乙腈-水=10:90，想着峰会不会延后，在10min左右出峰。但竟然跑了好久，也没东西出来。

请问大家是怎么回事呢？色谱柱太短了，做不出吗?
相同比例的流动相，色谱柱变短，粒径也变小了，同一物质的保留时间是缩短还是延迟？
下面是国标方法做出的图：

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2016/3/21 10:11:36 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

柱子变短，应该是缩短了出峰时间，你可以再试试调节一下水相与有机相的比例！调高水相，延长出峰时间，可以验证一下3分钟时候的峰是不是被测物质。

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happy水中月

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2016/3/21 10:36:18 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

你的国标出峰没有看到。
这个实验如果是我来做的话，会按照国标的条件走一个样品，看看有没有出峰。然后根据时间做出流动相和流速的调整。进的样品比国标的量高出10%试一下。不知道楼主目前做的结果如何？希望得到你的反馈

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yilishanshan

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2016/3/21 21:05:27 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

我第一次做荧光检测，目前实验室只有短柱子，国标流动相是0.05mol/磷酸./三乙胺：乙腈=82：18。实验室很多东西没有，我的流动相只是水-乙腈。磷酸和三乙胺应该只是让峰型好看点，对保留时间的影响不大吧。
水-乙腈=70:30，出峰时间大概是3min
水-乙腈=80:80，出峰时间是6min左右。
我觉得都太靠前了，就调成了90:10，就跑不出东西了。
我还调整了进样量10ul、20ul都做了，越做越乱。
不知道咋搞的。过两天把图谱拿来，请大家帮忙分析下。

我再去试试把对照品浓度加大，或者把乙腈改成甲醇试试、

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