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液相色谱（LC）
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主题：【求助】UPLC新手求助，各位大神们，帮帮小师妹吧。

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moshanghuakai
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发表于：2016/03/20 17:20:58 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
目标化合物的结构：

仪器：Waters H-class
色谱柱：BEH Amide, 2.1*100mm, 1.7um
用的条件：1. A相：10mM甲酸铵/甲酸， pH3
                    B相：已腈。
                    温度：35度
                    样品稀释液：流动相
                结果：峰很宽，拖尾（如图1）
图1. 酸性缓冲结果
                2. 换条件（因为BEH amide 柱推荐用碱性条件）
                  A相：10mM 碳酸氢氨/氨水， pH10.6  (柱子pH 范围2-11)
                  B相：已腈
                  温度：35度
                  梯度：0mim, 10%A+90%B; 5min,50%A+50%B; 9min, 90%A+10%B; 11min, 90%A+10%B, 11.1min, 10%A+90%B; 16min 10%A+90%B. 结果如图2：

但是，多跑几针之后，结果就变成了下图，就是峰上鼓出个包：

现在的问题是，即便使用第二钟方法，但梯度稀释后做标曲，峰面积不成比例，或高或低。想听听各位高手的意见，拜托拜托了。我已经辛苦做了几个月了。再拜，再拜。
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2016/3/20 18:29:56 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
你样品有很多酸性基团，碱性基团，亲水基团，你用的是亲水模式色谱柱，这里面作用力很复杂，对于你这样品，我觉得你可以先加大碱性流动相A的比例试试
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夏天的雪
bingwang228
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2016/3/21 9:40:59 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
从图上看貌似碱性条件更适合分析，看梯度条件能否再优化一下
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有水有渝
xky0230699
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2016/3/21 12:00:40 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
10mM甲酸铵/甲酸， pH3改为用30mM磷酸二氢钾/磷酸 PH3试试，有机相分别试一下乙腈与甲醇，如果还拖尾，加入0.05%三乙胺（PH3）试试。另外看不到峰强度，不知道进样浓度会不会太大。
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2016/3/21 12:01:14 Last edit by xky0230699
hujiangtao
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2016/3/21 13:56:36 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
正相柱子要多平衡一会儿
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moshanghuakai
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2016/3/27 15:46:37 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
各位大神们，我这几天忙着实验，没上来。现在回报最新结果，我试了，pH=2.2 和 pH=10.8, 峰都是严重拖尾。不知道该怎么做了。hilic柱不是要求物质成离子状态吗？这两个极端环境下，这个化合物一定是离子状态啊，但是还是不行啊。
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moshanghuakai
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2016/3/27 15:48:30 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 有水有渝(xky0230699) 发表:
10mM甲酸铵/甲酸， pH3改为用30mM磷酸二氢钾/磷酸 PH3试试，有机相分别试一下乙腈与甲醇，如果还拖尾，加入0.05%三乙胺（PH3）试试。另外看不到峰强度，不知道进样浓度会不会太大。
100uM，进样5ul, 峰高为25mAU. 峰很低啊。
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lhy86725
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2016/3/27 17:01:10 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
确保碱性条件下，起始A的浓度在放低一点，HILIC模式下水相越高，出峰越快，5min的水相比例也在低一点，减弱洗脱能力试试看看
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有水有渝
xky0230699
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2016/3/28 10:13:33 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
先加扫尾剂试试
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moshanghuakai
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2016/3/29 10:43:07 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 有水有渝(xky0230699) 发表:
先加扫尾剂试试
加了三乙胺扫尾，0.05%，效果不好，主峰直接裂成很多个分不开的小峰了。
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lijing320323
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2016/4/17 17:17:18 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这是类似ATP的结构吧,可以参考药典的方法,改变流动相
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