主题：【原创】本版开帖为征寻与“生物传感器/生物芯片”相关的讲义悬赏

来迟了，下次敢早来，呵呵

希望大家积极踊跃参加资料上传活动，有积分赠送

DNA 修饰电极是电化学DNA 传感器的重要部分, 该类传感器也多以此进行分类。ssDNA 修饰(或
固定) 到电极上的方法, 现有的文献报道主要集中在自组装膜法、吸附结合法、表面富集法、共价键结合
法、化学免疫法、组合法、生物素- 亲和素反应法和LB 膜法等。本文主要叙述以下几种:
2. 1 吸附结合法
该方法是将碳糊电极放到含DNA探针分子的乙酸缓冲溶液中在一定电位下活化电极, 然后在控制电
位下吸附富集探针分子, 最后用磷酸缓冲溶液淋洗后便可使用。其特点是简单、灵活, 但稳定性不够。
研究证明, ssDNA 在汞电极上的吸附性质为化学吸附, 生成吸附化学键, 质子化的ssDNA
分子通过嘌呤和嘧啶碱基上芳香杂环的π 键键合而吸附到汞电极上。采用吸附法在平
面热解石墨电极上固定了DNA 片段。他们还通过化学吸附在金电极表面修饰了20 mer 的DNA 探针,
该探针与v - myc 基因部分互补利用电化学富集方法将DNA 修饰到碳糊电极(CPE) 上, 制
成DNA 探针修饰电极。
2. 2 自组装膜法
即基于分子的自组作用, 在固体表面自然形成高度有序的单分子层膜的方法。在DNA 技术中, 一
般是利用带巯基( —SH) 的化合物在金电极表面上可以形成自组装单分子膜的特性来固定核酸。其特点
是表面结构高度有序, 稳定性好, 有利于杂交; 但对巯基化合物修饰的DNA 的纯度要求较高, 分离提纯
操作较烦琐。
白燕等人利用自组装单分子膜技术, 考察了ssDNA/ Au 电极、dsDNA/ Au 电极的指示剂氧化峰电
流。研究表明, ssDNA/ Au 电极、dsDNA/ Au 电极的指示剂氧化峰电流响应值之差与互补DNA 浓度在一
定范围内呈线性关系, 据此可以识别特定序列的DNA , 并对其进行定量。陆琪[ 15 ] 等人采用先进行—SH
化合物自组装, 得到自组装单分子层, 再在其上共价键合或吸附固定DNA 的方法, 制备DNA 修饰电极,
克服了由于—SH修饰的DNA 难以合成, 并且需要分离提纯, 操作繁琐的缺点。XU等先将4- 巯基丁
基膦酸(MBPA) 在纯乙醇中固定到硅晶片的金膜上, 然后再与Al 3 +反应, 形成一层包含Al 3 +的膜, 再通过
Al 3 +与DNA 之间的静电作用将ssDNA 固定到电极上。
2. 3 共价键结合法
该法首先对电极进行活化预处理, 以引入活性键合基团, 然后进行表面的有机合成, 通过共价键合
反应把探针分子修饰到电极表面。如在氧化的玻碳电极表面, 以一种水溶液的乙基- (3- 二甲基丙基) 碳
二亚胺盐酸和N- 羟基磺基琥珀酰亚胺作为偶联活化剂, 小牛胸腺DNA 和多聚脱氧鸟苷酸、多聚脱氧胞
苷酸片段通过与活化的电极表面( O- 酰基异脲) 形成磷酰胺键共价结合到电极表面。其特点是修饰层稳
124 分析测试学报第24 卷
© 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.
定, 易进行分子杂交, 但由于电极表面活性位点有限, 表面合成又是异相反应, 因而固定的DNA 量有
限, 响应信号小。
S. Lin  采用共价键法, 成功地在石墨电极上固定了DNA 探针。赵元弟等[ 20 ] 采用巯基化合物
自组装/ 共价键合反应的逐层固定方法, 将双链DNA 固定到金电极表面, 得到DNA 修饰电极, 并对该电
极表面进行了电化学和X射线光电子能谱表征, 研究了电极表面固定化小牛胸腺DNA 和一种具有10 碱
基长度的寡聚核苷酸探针分别与溶液中DNA 的表面分子杂交情况。
2. 4 化学免疫法
在免疫传感器的研究及应用方面, 本课题组研究了多种Nafion 膜修饰微铂电极对溶液中NO 的电化
学行为进行了研究, 并用自行设计合成的大环镍制成了Nafion 膜修饰电极, 实现了对多巴胺和肾
上腺素这两种哺乳动物的重要神经递质的同时测定; 用PVC 膜修饰的免疫电极采用流动注射分析了
乙肝抗原; 通过戊二醛偶联乙肝表面抗体(抗- HBs) , 用自组装的硫脲单分子层金免疫电极, 检测了
乙肝表面抗原。采用了溶胶- 凝胶( sol - gel) 技术, 成功将乙肝表面抗体(HBsAb) 包埋于sol - gel 中,
此方法可用于检测乙肝表面抗原HBsAg。同时结合溶胶- 凝胶( sol - gel) 和交联技术, 将乳腺癌抗体
固定在铂盘电极表面的氨基化sol - gel 功能膜上, 用于检测乳腺癌抗原(CA15 - 3) 的免疫传感器[ 29 ] 等。
利用化学免疫法固定DNA 首先在电极表面键合抗生蛋白(avidin) , 然后利用抗生蛋白与生物素之间
的亲和作用, 使其与5′端标记有生物素(biotin) 的DNA 结合, 因而将DNA 固定于电极表面。Yoshio 利
用avidin 与biotin 的基本反应通过多层分子组装将dsDNA 片段固定化, 用以测定相对分子质量小的有机
物质和氯代联苯、氯代酚、双酚A、溴化乙啶等。
2. 5 组合法
该法是将化学修饰剂与电极材料混合以制备组合修饰电极。Millan  将18- 烷基胺或18- 烷基酸混
入碳糊中, 得到修饰的碳糊电极。在DEC 存在下, 18- 烷基胺的氨基与ssDNA 5′末端的磷酸基形成磷酰
氨键, 并将其固定在电极上

固定化技术在生物传感器中的应用
呵呵，支持一下

染色质免疫沉淀技术在研究DNA与蛋白质相互作用中的应用
Application of Chromatin Immunoprecipitation Assay in Deciphering DNA-Protein Interactions

染色质免疫沉淀技术在研究DNA与蛋白质相互作用中的应用

RNAi作为新近发展起来的基因功能分析技术，近年来在哺乳动物细胞中的研究已取得了长足进展，且有着广泛的应用前景。对RNAi作用机制及RNAi实验操作技术的探讨是目前研究的热点。研究表明，哺乳动物细胞中的RNAi作用模式与植物有所不同。文章对RNAi作用机制、哺乳动物细胞RNAi实验的一般策略（包括靶siRNA序列选择、siRNA获取方法、siRNA转染、RNAi效果检测等）以及最新研究进展进行简述，以供类似工作的参考。

RNA干涉（RNAi）技术应用于哺乳动物细胞的研究策略

自1997年首次成功构建人类人工染色体(human artificial chromosome，HAC)以来，对其理论、方法学问题的研究一直就是人们关注的焦点，并引起了科学家们的极大兴趣，目前已能采用不同的方法获得多种类型的HAC。与酵母人工染色体（YAC）、细菌人工染色体（BAC）等相比，HAC不整合到细胞的基因组中，以一个独立的功能性染色体单位而存在，并在细胞中进行正常的有丝分裂和减数分裂。迄今的研究表明：HAC可以携带大片段基因组DNA，是研究人类基因表达和调控、染色体功能基本单元的重要工具，也是建立HAC动物模型的重要手段。在未来的基因治疗方面有着广阔的应用前景。
人类人工染色体作为转基因载体的应用前景

单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism, SNP）的研究已成为人类后基因组时代的主要内容之一。因此建立高度自动化和高通量的SNP检测分析技术十分重要。文章系统地介绍了最新发展的几种SNP检测技术的原理和检测平台，详细阐述了等位基因特异性杂交、内切酶酶切技术、引物延伸法、寡核苷酸连接反应等SNP检测原理，以及平板读数仪、基因芯片、微球阵列技术和质谱仪等检测平台，并对SNP高通量检测技术的发展进行了展望。
单核苷酸多态性检测方法的研究进展

文章报道了一种简便、通用、高效的复杂载体构建方法。此法是在PCR引物设计时，在目的片段5′端加上随机设计的接头，利用PCR克隆目的片段，再用T4 DNA聚合酶3′→5′外切酶活性处理PCR克隆目的片段，产生多个首尾相匹配的粘性末端，进行多片段定向连接、转化、重组子鉴定。以7片段拼接的水稻单交换质体定点整合表达载体pRSMGA的构建为例，应用上述方法构建只需做两次连接、转化,且其重组、转化效率高。数10次实验证明：这是一种简便、通用、高效的复杂构建载体的方法，该法至今尚未见报道。
一种通用高效的复杂载体构建的新方法

暴走追风少校，给点机会别人好不好