当合成出耐离压并能在广泛pH值范围使用的新型固定相后,还要进行颗粒的筛选,以获取粒径分布尽可能窄的填料。如在HPLC使用的5μm颗粒填料中,其粒径分布一般较宽。会含有大量的4μm以下和6μm以上的粒子,填充后会造成柱效的损失。Waters公司开发的筛分技术。可以大批量生产1.7μm粒径分布很窄的高质量填料。
最后要将高质量的填料装填进2.1mm×100mm的色谱柱.即使柱筛板能堵住1.7μm小颗粒不外流,又不至于引起柱压的大辐升高,还能获得达20万块/m理论塔板数高柱效的色谱柱。Waters公司新设计的装填技术,使用了全新筛板,柱管和连接件,在超过140MPa(20000psi)压力下装填,产生了更稳定的柱床,保AQUITY UPLC色谱柱的高柱效和长寿命。
为加强可迫溯性,在每根AQUITY UPLCTMC18(ф2.1mm×100mm)色谱柱都装备一个称为eCordTM的装置,它可记录色谱柱的进样次数,最大反压及温度,还包括该色谱柱独特的分析证书(certificate of analysis)。
2.超高效
液相色谱的输液泵
制造超高压输液泵除了实现密封和提供高压驱动力外。还需解决在超高压下。溶剂的可压缩性及绝热升温问题。
Waters公司为AQUITY UPLCTM色谱柱装备了一台用独立柱塞驱动,可进行4种溶剂切换的二元高压梯度泵,对柱长10cm、填充1.7μm固定相的色谱柱,其达到最佳柱效时的1.0mL/min流速,耐高压可达105MPa(15000psi)。在此压力下,溶剂尤其是梯度分离时使用的混合溶剂,其压缩性会有显著变化,因此溶剂输送系统可在很宽压力范围内,具有补偿溶剂压缩性变化的能力,从而能在等度或梯度分离条件下保持流速的稳定性和操度的重现性。此外,经过集成改进的真空脱气技术,可使4种流动相溶剂得到良好的脱气。
在普通HPLC:的高压梯度系统,在起始3%(0%~3%)和最后3%(97%~100%)时的梯度混合性能较差。AQUITY UPLCTM的超高压输液泵,梯度性能极佳,当梯度陡度为1%,梯度范围为100%~90%.时,获得的梯度运行由线如图7-18所示。