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主题：【求助】请问用SDS-PAGE测量蛋白质复合物分子量，在样品处理时是否一定要加热呢？

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ll7509
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发表于：2006/12/20 07:14:00 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
请问用SDS-PAGE测量蛋白质复合物分子量，在样品处理时是否一定要加热呢？
加热会使蛋白质变性，改变复合物的性质，影响结果的。
多谢！
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lxdongzi2003
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2007/1/1 17:41:00 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 ll7509 发表:
请问用SDS-PAGE测量蛋白质复合物分子量，在样品处理时是否一定要加热呢？
加热会使蛋白质变性，改变复合物的性质，影响结果的。

SDS-PAGE原理：
蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时，它的迁移取决于它所带电荷以及分子大小和形状等因素。如果在聚丙烯酰胺系统中加入阴离子去污剂十二烷基磺酸钠(SDS),大多数蛋白质能与SDS按一定比例结合，即每克蛋白质结合1.4g的SDS－复合物都带上相同密度的负电荷，它的量大大超过了蛋白质分子原有的电荷量，因而消除了蛋白质原有的电荷差别，使蛋白质分子电泳的迁移率主要取决于本身的分子量，而与蛋白质所带的电荷无关，在一定条件下，蛋白质的分子量的对数与电泳迁移率间呈负相关。
加热会使蛋白质变性，肯定会改变复合物的性质，只要不是改变分子量/表观分子量，就不会影响结果。
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家有宝贝儿
menghandna
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2007/1/4 14:02:00 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 ll7509 发表:
请问用SDS-PAGE测量蛋白质复合物分子量，在样品处理时是否一定要加热呢？
加热会使蛋白质变性，改变复合物的性质，影响结果的。
多谢！

还原型SDS-PAGE本身就是对蛋白的一个变性过程。
加热是SDS-PAGE测量蛋白质复合物分子量的必须步骤。
通过加热，促进蛋白形成椭圆结构，椭圆的短轴一致，长轴依据蛋白的分子量而不同，在电泳中表现为不同的泳动速率，与蛋白标准对照，从而达到测定分子量的目的。
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liuzhenzhong
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2007/1/7 10:04:00 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
疏水性特别强的蛋白质,比如那些含有多个跨膜结构域的蛋白,在100度下处理可能会发生沉淀或聚合,于是可以改用(45-55)的温度加热样品1小时达到变性的目的.
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longly
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2007/1/7 15:07:00 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
做了这么长时间，只知道加热这一步是为了变性，让蛋白在聚酰胺内能更好地转移，但从来没考察过其机理！学习了！
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liujie8-131
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2008/5/23 19:13:19 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 liuzhenzhong 发表:
疏水性特别强的蛋白质,比如那些含有多个跨膜结构域的蛋白,在100度下处理可能会发生沉淀或聚合,于是可以改用(45-55)的温度加热样品1小时达到变性的目的.

请问：我的目标蛋白是疏水性较强的跨膜蛋白，但我不知（45-55）的温度能否使菌体破碎并使蛋白质充分变性？谢谢!!
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Last edit by liujie8-131
canis
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2008/9/2 8:58:50 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
算分子量的话,你的复合物如果有支链的话可能就会跑出多条条带,这时计算分子量就要把它们都加起来算.
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renmeng88711
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2012/1/12 14:57:07 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
学习了  跑了这么长时间的胶  才知道加热就是仅仅为了变性蛋白
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