主题:【原创】化学发光免疫诊断ivd中常用的化学发光底物试剂参数

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胱硫醚β-合成酶
脑卒中是一种复杂的多因素、多基因疾病,可以由基因与基因或是基因与环境的相互作用引起。高同型半胱氨酸血症(hyperhomocysteine, Hhcy)是缺血性脑卒中的一个重要危险因素。

胱硫醚β合成酶(cystathionine βsynthase, CBS)是一种细胞质中的同源四聚体,由63 KD的亚基组成,是一种磷酸吡哆醛(pyridoxal phosphate ,PLP )依赖性酶。在维生素B6的催化下, CBS能使丝氨酸与同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)合成胱硫醚。作为影响Hcy水平的一种关键酶, CBS在Hcy转变成胱硫醚的转硫酸路径中起着举足轻重的作用。该酶在酶循环方法学中,用于血液中同型半胱氨酸的检测。

产品说明:
剂型:微黄色、黄色粉末, 或液体
冻干前保存缓冲液:磷酸缓冲液,pH7.4
来源:微生物重组表达蛋白
等电点: 6.49
酶学编号:EC4.2.1.22
pH稳定性:7.4-8.5
分子量: 56KDa左右(SDS-PAGE检测)
纯度:≥90%(SDS-PAGE检测)
酶活:150 U/mg蛋白
酶活定义:37℃、pH8.0,固定反应条件下,每分钟催化反应使得NADH在340nm的吸光度下降0.01定义为一个酶活性单位。
保存条件:4℃保存一年左右(-20℃或-80℃,可保存更长时间,尽量避免反复冻融)
运输条件:低温冰袋
用途:该蛋白可用于胱硫醚法检测Hcy试剂盒的研发、生产
安全提示:本试剂仅用于研发或生产,严禁用于人体或动物实验
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色原底物如TOOS、MAOS,荧光底物,化学发光底物如鲁米诺、吖啶酯,这些都是非常重要的底物。
除了吖啶酯不需要酶的催化之外,其它的都是作为辣根过氧化物酶HRP的底物,在HRP的催化下才能与过氧化氢反应。
其中色原底物用于生化试剂盒如检测肝肾功能血糖血脂等,鲁米诺吖啶酯用于免疫试剂盒,如肿瘤标志物、心肌损伤标志物,肝肾炎,性病等。
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鲁米诺在水中的溶解度很低,一般溶在碱性溶液里,
例如Luminol储备液0.01mol/L :
1.772g鲁米诺用0.1mol/L,的氢氧化钠溶液溶解,定容至1L
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吖啶酯化学发光标记常用的几种缓冲液有Tri-HCl、PBS/BSA、MES等缓冲液,具体的可以根据标记的对象蛋白/抗体、核酸,适应的pH调整,以选用最合适的浓度及合适的缓冲剂
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新型的吖啶酯与传统吖啶酯相比有很多优越的性能,更能满足实验检测的需求,在合成上需要更多的步骤来作官能团的修饰,吖啶环上无取代和有取代的吖啶酯的合成路线区别也是很大的
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在检测时,Trinder‘s显色试剂TOOS、MAOS等与4-AA偶联显色反应,在本质上与化学发光法类似,都是作为过氧化物酶的指示底物,只不过一个是作为色原底物,一个是作为发光底物。
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"吖啶酯DMAE-NHS 和吖啶酯Me-DMAE-NHS非常相似

差别是吖啶的N原子上连的一个是硫酸甲酯基,一个是三氟甲基磺酸基。都比传统吖啶酯AE-NHS位阻大,抗水解能力强。
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吖啶酯化学发光的关键在于吖啶酯在碱性条件下与过氧化氢相互作用形成过氧化合物的活泼中间体,然后再在电激发的条件下转化为稳定的终产物:吖啶酮,同时能量以光的形式释放出来。吖啶酯化学发光反应机理的特点反应光淬灭的效应较小,而且反应过程中的发光基团的解离、发光效率等都不会受到连接臂长短的影响。
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鲁米诺/发光氨通常用于酶促化学发光实验以及刑侦上的微量血迹检测。由于其结构简单、易合成、发光量子效率高的特点,现也被用于蛋白质印迹试验western blot中。
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鲁米诺通常是在过氧化物酶的催化下被过氧化氢氧化而发出淡蓝色辉光,属于酶促化学发光试剂;但是如果是在氧化型较强的试剂中,鲁米诺也可以不需要酶的催化,便可以氧化发光,如三价铁离子、铜离子等。
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