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我第一次做固相,样品是这样处理的:500ul的血浆加入50ul流动相(MeOH:1%甲酸=67:33),50ul水,100ul的1M/NaOH,10000rpm离心后上1mgC18小柱,(之前是2ml甲醇,1ml水活化)2ml的0.01M/NaOH分两次淋洗,1ml甲醇洗脱。洗脱液氮气挥干,200ul流动相溶解,4000rpm离心10分钟,20ul进样。LC-MS分析。
结果柱子在进样2-3针后柱压就会升高3-4bar!郁闷死了!怎么还不如做液液萃取呢?还有,精密度也不好!我用的是安捷伦的固相萃取仪,发现有的流速不一致,从血浆上样就开始不一样了。我的精密度是同时做三个浓度,每个浓度6份。20孔的固相萃取仪。
高手给指点迷津啊!!