主题：【第十二届原创】高效液相色谱(HPLC)技术在NH杀虫剂及其微胶囊有效含量测试中的应用研究

摘要：为分离和定量分析NH杀虫剂及其微胶囊的有效含量，本文采用了高效液相色谱法，并通过标准曲线、精密度、检出限和加标回收率等参数对此方法进行评价。实验结果表明，在设定的HPLC条件下，标准曲线的线性相关系数为0.99976，精密度为0.64%，检出限为1.127ppm，加标回收率为104.1%，均符合要求； NH杀虫剂标样与NH杀虫剂微胶囊有效成分萃取液二者出峰时间均为5min，且与其他杂质峰能互相分离。
关键词：高效液相色谱；NH杀虫剂；微胶囊；标准曲线；精密度
Abstract: Inorder to isolate and quantitatively analyze the effective content of NHinsecticide and its microcapsules, high performance liquid chromatographymethod is used and the method is evaluated by parameters such as standard curve,precision, detection limit and recovery. The results show that under the setHPLC condition, the linear correlation coefficient of the standard curve is0.99976, the precision is 0.64%, the detection limit is 1.127 ppm, the recoveryis 104.1%, all meet the requirements. The peak time of NH pesticide sample and itsmicrocapsules’ active ingredient extract are both 5min and separated from otherimpurity peaks.
Keywords: highperformance liquid chromatography; NH insecticides; microcapsule; standardcurve; precision
1 前言
高效液相色谱技术简称HPLC技术是一种利用高压泵将极性溶剂泵入装有填充剂的色谱柱，经进样阀注入的样品被流动相带入色谱柱内进行分离后进入检测器，由记录仪记录色谱信号并进行数据处理得到分析结果的一种新型技术[]。由于HPLC技术具有响应快速、反应灵敏、准确度好、精密度高的特点，适用于分析低分子量低沸点样品、高沸点样品、中等分子量及高分子有机物、离子型无机物、热不稳定化合物，目前已广泛使用于农药、氨基酸、蛋白质、多糖、金属有机物等物质的分析。
NH杀虫剂是一种氨基甲酸酯类杀虫剂，能够高效杀虫，并且残留率低。但由于NH杀虫剂在碱性介质中迅速分解、难溶于水且具有中等危害毒性，因此可以将NH杀虫剂进行微胶囊化从而降低NH杀虫剂的毒性，延长其有效期。
本研究采用反相高效液相色谱法，对NH杀虫剂原液以及其微胶囊制剂的有效含量进行分析研究，并对此方法的有效性进行评估。
2 实验部分
2.1 实验试剂及仪器
实验使用的主要试剂及仪器见表1、2。

表1 实验试剂

化学试剂名称	规格	厂家
95%NH杀虫剂原药	Tech	--
NH杀虫剂/甲醇标准溶液	PA	上海谷研有限公司
乙腈	HPLC	西格玛奥德里奇贸易有限公司

表2实验仪器

仪器名称	厂家
920-LC高效液相色谱仪	美国瓦里安公司
超声波清洗机	上海科导超声仪器有限公司
分析天平	上海菁海仪器有限公司

2.2 实验方法
2.2.1 高效液相色谱检测条件
①色谱柱：Inertsil ODS-2（4.6×250mm,5μm）
②流动相(MP)：乙腈：水=6:4
③萃取相（ES）:乙腈
④流速：1mL/min
⑤柱温：35℃
⑥进样量：20μL
⑦检测波长：254nm
在上述高效液相色谱条件下对NH杀虫剂标样（NH杀虫剂/甲醇标准溶液）进行测定，出峰位置在5.003min，其高效液相色谱图如图1所示。

图1NH杀虫剂标样高效液相色谱图

2.2.2 标准曲线制作
准确称取NH杀虫剂原药0.500g置于100mL容量瓶中，用HPLC乙腈定容，摇匀。分别移取上述溶液10、20、50mL置于100mL容量瓶中，用HPLC乙腈定容，摇匀。测试前用0.22μm的有机相滤膜过滤。在上述HPLC条件下进行测试，以NH杀虫剂浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线。然后利用精密度和加标回收率来对本测试方法进行评价。
2.2.3 NH杀虫剂微胶囊有效成分提取
准确称取0.100g微胶囊样品于样品瓶中，加入10mL乙腈超声震荡萃取60min，得到的萃取液用0.22μm的有机相滤膜过滤待检。
3 结果与讨论
3.1 标准曲线
定量分析主成分时，要求标准曲线的线性相关系数高于0.999。在上述HPLC检测条件下，NH杀虫剂浓度与峰面积响应值线性关系如图2所示。标准曲线的线性方程为y=2671.5x+13809.6，线性相关系数为0.99976，满足定量分析要求。

图2NH杀虫剂浓度与峰面积响应值线性关系图

3.2 精密度测试
选择浓度为50ppm的样品连续进样7次进行相对标准偏差（RSD）计算，表示精密度：

对主成分进行定量分析，要求此方法的RSD在0~3%之间。计算得RSD为0.64%，可以达到定量分析的要求。

表3精密度分析结果

编号	响应值   (mAU,min)	均值   (mAU,min)	标准差   SD	相对标准差   RSD(%)
1	143748	144106.43	925.05	0.64
2	143263
3	143527
4	143410
5	145363
6	143959
7	145475

3.3检出限测试
选择浓度为1ppm的样品溶液表征其检出限（DL）。
DL=
---11次空白样品的标准差
---3次样品溶液响应值的均值
c --- 样品的实际浓度
计算得，检出限为1.127ppm，说明本方法可以测定响应信号的最小量为1.127ppm。
3.4 加标回收率测试
取浓度为100ppm的样品0.8mL加入浓度为100ppm的标样0.2mL中，形成加标样进行测定。
加标回收率R=
计算得到加标回收率R=104.1%,符合95%~105%的要求。

表4加标回收率分析结果

编   号	样品量   (mL)	标样量   (mL)	响应值   (mAU,min)	均值   (mAU,min)	回收率   （%）
1	0.8	0	285995	286054	104.1
			287124
			285043
2	0	0.2	259972	261867
			260700
			264929
3	0.8	0.2	282044	283383
			285003
			283102

3.5 NH杀虫剂微胶囊有效成分测定
在上述液相色谱条件下，测定NH杀虫剂微胶囊的萃取液，出峰位置为4.996min，其高效液相色谱图如图3所示。

图3NH杀虫剂微胶囊样品高效液相色图谱

图3表明，NH杀虫剂微胶囊的有效成分和其他杂质峰能互相分离，无相互干扰。与图1对比，在相同的高效液相色谱条件下，NH杀虫剂标样与NH杀虫剂微胶囊有效成分萃取液二者出峰时间均为5min。
4 结论
综上所述，在上述液相色谱条件有良好的准确性、精密度和回收率，能够高效、准确地对NH杀虫剂及其微胶囊有效成分进行定量分析。

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参考文献
] 周怡. 柄海鞘（Styela clava）活性物质的提取分离、纯化及活性研究.山东：山东师范大学，2008：30.