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主题：【求购】什么时候选择梯度洗脱

浏览0 回复9 电梯直达
pengguifang
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发表于：2007/02/08 12:44:00 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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请问各位大侠，什么情况下选择梯度洗脱啊，对物质有什么要求？是物质本身得性质决定要梯度洗脱吗？梯度洗脱时流动相怎么搭配，比例怎么定啊？
推荐答案：xhj0804回复于2007/02/08
转：
梯度洗脱是在一个分析周期内程序控制流动相的组成，如溶剂的极性、离子强度和pH值等，用于分析组分数目多、性质差异较大的复杂样品。采用梯度洗脱可以缩短分析时间，提高分离度，改善峰形，提高检测灵敏度，但是常常引起基线漂移和降低重现性。
梯度洗脱有两种实现方式：低压梯度（外梯度）和高压梯度（内梯度）。
两种溶剂组成的梯度洗脱可按任意程度混合，即有多种洗脱曲线：线性梯度、凹形梯度、凸形梯度和阶梯形梯度。线性梯度最常用，尤其适合于在反相柱上进行梯度洗脱。
在进行梯度洗脱时，由于多种溶剂混合，而且组成不断变化，因此带来一些特殊问题，必须充分重视：
①要注意溶剂的互溶性，不相混溶的溶剂不能用作梯度洗脱的流动相。有些溶剂在一定比例内混溶，超出范围后就不互溶，使用时更要引起注意。当有机溶剂和缓冲液混合时，还可能析出盐的晶体，尤其使用磷酸盐时需特别小心。
②梯度洗脱所用的溶剂纯度要求更高，以保证良好的重现性。进行样品分析前必须进行空白梯度洗脱，以辨认溶剂杂质峰，因为弱溶剂中的杂质富集在色谱柱头后会被强溶剂洗脱下来。用于梯度洗脱的溶剂需彻底脱气，以防止混合时产生气泡。
③混合溶剂的粘度常随组成而变化，因而在梯度洗脱时常出现压力的变化。例如甲醇和水粘度都较小，当二者以相近比例混合时粘度增大很多，此时的柱压大约是甲醇或水为流动相时的两倍。因此要注意防止梯度洗脱过程中压力超过输液泵或色谱柱能承受的最大压力。
④每次梯度洗脱之后必须对色谱柱进行再生处理，使其恢复到初始状态。需让10~30倍柱容积的初始流动相流经色谱柱，使固定相与初始流动相达到完全平衡。
补充答案：

5u213回复于2007/02/08

对不起，我也正在查询。

peonyl回复于2007/02/08

我以前做的是等度的时候时间太长才改了梯度
峰形变得比较好

Easy-Boy回复于2007/02/09

当等度洗脱不能分开你要检测的物质或目标物在色谱上没保留时，就试试梯度洗脱。

lenovο回复于2007/02/08

是物质本身得性质决定的。梯度洗脱时流动相怎么搭配，比例怎么定都是根据不同的物质决定的，这里不能统一定。需要摸索的。正因为分析方法需要摸索，所以分析方法是可以卖钱的。

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2007/2/8 14:37:00 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
是物质本身得性质决定的。梯度洗脱时流动相怎么搭配，比例怎么定都是根据不同的物质决定的，这里不能统一定。需要摸索的。正因为分析方法需要摸索，所以分析方法是可以卖钱的。
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呆呆牛
lcms2006
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2007/2/8 14:55:00 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
被分析的物质用等度洗脱分不开的时候就应该考虑剃度了，剃度的选择要根据物质极性的差异选择。
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风之彩
juju11
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2007/2/8 15:12:00 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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梯度洗脱是在一个分析周期内程序控制流动相的组成，如溶剂的极性、离子强度和pH值等，用于分析组分数目多、性质差异较大的复杂样品。采用梯度洗脱可以缩短分析时间，提高分离度，改善峰形，提高检测灵敏度，但是常常引起基线漂移和降低重现性。
梯度洗脱有两种实现方式：低压梯度（外梯度）和高压梯度（内梯度）。
两种溶剂组成的梯度洗脱可按任意程度混合，即有多种洗脱曲线：线性梯度、凹形梯度、凸形梯度和阶梯形梯度。线性梯度最常用，尤其适合于在反相柱上进行梯度洗脱。
在进行梯度洗脱时，由于多种溶剂混合，而且组成不断变化，因此带来一些特殊问题，必须充分重视：
①要注意溶剂的互溶性，不相混溶的溶剂不能用作梯度洗脱的流动相。有些溶剂在一定比例内混溶，超出范围后就不互溶，使用时更要引起注意。当有机溶剂和缓冲液混合时，还可能析出盐的晶体，尤其使用磷酸盐时需特别小心。
②梯度洗脱所用的溶剂纯度要求更高，以保证良好的重现性。进行样品分析前必须进行空白梯度洗脱，以辨认溶剂杂质峰，因为弱溶剂中的杂质富集在色谱柱头后会被强溶剂洗脱下来。用于梯度洗脱的溶剂需彻底脱气，以防止混合时产生气泡。
③混合溶剂的粘度常随组成而变化，因而在梯度洗脱时常出现压力的变化。例如甲醇和水粘度都较小，当二者以相近比例混合时粘度增大很多，此时的柱压大约是甲醇或水为流动相时的两倍。因此要注意防止梯度洗脱过程中压力超过输液泵或色谱柱能承受的最大压力。
④每次梯度洗脱之后必须对色谱柱进行再生处理，使其恢复到初始状态。需让10~30倍柱容积的初始流动相流经色谱柱，使固定相与初始流动相达到完全平衡。
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5u213
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2007/2/8 16:02:00 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
对不起，我也正在查询。
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peonyl
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2007/2/8 16:11:00 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我以前做的是等度的时候时间太长才改了梯度
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xhj0804
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2007/2/8 16:49:00 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
是物质本身得性质决定的。梯度洗脱时流动相怎么搭配，比例怎么定都是根据不同的物质决定的，这里不能统一定。需要摸索的。正因为分析方法需要摸索，所以分析方法是可以卖钱的。

被分析的物质用等度洗脱分不开的时候就应该考虑梯度了，梯度的选择要根据物质极性的差异选择。


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xhj0804
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2007/2/8 16:49:00 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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梯度洗脱是在一个分析周期内程序控制流动相的组成，如溶剂的极性、离子强度和pH值等，用于分析组分数目多、性质差异较大的复杂样品。采用梯度洗脱可以缩短分析时间，提高分离度，改善峰形，提高检测灵敏度，但是常常引起基线漂移和降低重现性。
梯度洗脱有两种实现方式：低压梯度（外梯度）和高压梯度（内梯度）。
两种溶剂组成的梯度洗脱可按任意程度混合，即有多种洗脱曲线：线性梯度、凹形梯度、凸形梯度和阶梯形梯度。线性梯度最常用，尤其适合于在反相柱上进行梯度洗脱。
在进行梯度洗脱时，由于多种溶剂混合，而且组成不断变化，因此带来一些特殊问题，必须充分重视：
①要注意溶剂的互溶性，不相混溶的溶剂不能用作梯度洗脱的流动相。有些溶剂在一定比例内混溶，超出范围后就不互溶，使用时更要引起注意。当有机溶剂和缓冲液混合时，还可能析出盐的晶体，尤其使用磷酸盐时需特别小心。
②梯度洗脱所用的溶剂纯度要求更高，以保证良好的重现性。进行样品分析前必须进行空白梯度洗脱，以辨认溶剂杂质峰，因为弱溶剂中的杂质富集在色谱柱头后会被强溶剂洗脱下来。用于梯度洗脱的溶剂需彻底脱气，以防止混合时产生气泡。
③混合溶剂的粘度常随组成而变化，因而在梯度洗脱时常出现压力的变化。例如甲醇和水粘度都较小，当二者以相近比例混合时粘度增大很多，此时的柱压大约是甲醇或水为流动相时的两倍。因此要注意防止梯度洗脱过程中压力超过输液泵或色谱柱能承受的最大压力。
④每次梯度洗脱之后必须对色谱柱进行再生处理，使其恢复到初始状态。需让10~30倍柱容积的初始流动相流经色谱柱，使固定相与初始流动相达到完全平衡。
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Easy-Boy
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2007/2/9 8:20:00 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
当等度洗脱不能分开你要检测的物质或目标物在色谱上没保留时，就试试梯度洗脱。
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2007/2/9 14:27:00 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
多谢各位大侠指点。但是我做了几个月高效液相实验，发现一般都是中药材用梯度洗脱，西药很少（而目前我还没用过梯度洗脱）是不是因为用梯度的话药材各峰会分的比较开啊？
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