主题:【已应助】液相峰出现牛角峰

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Insm_be373d7d
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近期做的一个项目中流动相使用的是PH3.0的磷酸盐和乙腈和水,出现了好多问题,有时找不到原因
问题1:配制流动相时一次性配制4升,所以会将溶解好的溶液先倒入大瓶子中,然后再加入别的,有时不小心撒了一些,有时没出现问题,有时标准品出现了牛角一样的峰型,洒了一些改变的是比例,会使峰分裂么?
问题2:乙腈的加法有没讲究,我们试过分开过滤再加和乙腈稀释过后加入一同过滤?主要影响的是出峰时间,哪种更好
问题3:分开过滤后再加乙腈又出现了标准峰变成牛角的问题?会是这个引起的么?
问题4:不同人的配制过程已经出现了好几次,确定配比没错而峰却又分裂的问题,找不出问题在哪。以往出峰时间晚了就多加人一点乙腈会使得峰提前,最近一次也是峰出晚了,补加了点乙腈就又出现了峰的峰型分裂成牛角。
检测过程使用的是安捷伦仪器,压力一般比较稳定。检测新人被这个问题困扰很久,希望有前辈可以帮忙解决这个问题
一开始是两个大小接近的分裂峰,后来把流动相重新混匀再测只有保留时间提前,之后有卸了预柱出现了一大一小的分裂峰
最佳答案:dadgoh回复于2020/10/04
1.如果流动相走的是是等比例,可以先将流动相混均后再过膜脱气。
2.这俩图的保留时间不一样,说明你们走的流动相是有变化的。
3.上一张正常的图,大家好给你分析原因。
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lsyecspc
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最好是用四无泵,分别过滤后使用两个流路在线混合。如果使用先混合再过滤,抽滤时乙腈会因为易挥发损失一些,造成比例不准确。如果要分开过滤再混合,容易造成混合不均匀。如果液相没有带脱气机也溶易出现气泡。峰分叉可能是因为流动相不无效造成的。
dadgoh
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1.如果流动相走的是是等比例,可以先将流动相混均后再过膜脱气。
2.这俩图的保留时间不一样,说明你们走的流动相是有变化的。
3.上一张正常的图,大家好给你分析原因。
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原文由 dadgoh(dadgoh) 发表:1.如果流动相走的是是等比例,可以先将流动相混均后再过膜脱气。2.这俩图的保留时间不一样,说明你们走的流动相是有变化的。3.上一张正常的图,大家好给你分析原因。
正常是这样子
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原文由 dadgoh(dadgoh) 发表:1.如果流动相走的是是等比例,可以先将流动相混均后再过膜脱气。2.这俩图的保留时间不一样,说明你们走的流动相是有变化的。3.上一张正常的图,大家好给你分析原因。
是等比例,有重新混匀,但没有重新过膜,重新过膜是可以改善什么方面呢
Insm_be373d7d
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原文由 lsyecspc(liushuyong) 发表:最好是用四无泵,分别过滤后使用两个流路在线混合。如果使用先混合再过滤,抽滤时乙腈会因为易挥发损失一些,造成比例不准确。如果要分开过滤再混合,容易造成混合不均匀。如果液相没有带脱气机也溶易出现气泡。峰分叉可能是因为流动相不无效造成的。
比例确实会不准,我们纠结的问题是比例不准会不会是引起峰分裂的原因,因为时而出问题,时而正常的
sdlzkw007
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建议你们把两个或者三个流动相分别配制、抽滤,然后使用仪器的在线混合功能尝试一下,多做对比,按照差异分析问题。个人觉得你们的问题在于1)流动相比例不准确2)流动相预混合不正确,理论上需要把混合的两个或者三个流动相分别配制好,然后混合在一起超声、抽滤,根据使用条件控制总量不超过10个小时,到时间之后需要重新制备。以便控制实验条件的一致性。注意同比例的2个流动相在线混合比预混合的出峰时间会晚一些。
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原文由 sdlzkw007(sdlzkw007) 发表:建议你们把两个或者三个流动相分别配制、抽滤,然后使用仪器的在线混合功能尝试一下,多做对比,按照差异分析问题。个人觉得你们的问题在于1)流动相比例不准确2)流动相预混合不正确,理论上需要把混合的两个或者三个流动相分别配制好,然后混合在一起超声、抽滤,根据使用条件控制总量不超过10个小时,到时间之后需要重新制备。以便控制实验条件的一致性。注意同比例的2个流动相在线混合比预混合的出峰时间会晚一些。
你说的这些回头我问问领导看看尝试一下,那如果之前用剩下的流动相,当时没问题,再拿来用又出现了分裂,又会是因为什么呢
mouguangyin
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dadgoh
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原文由 Insm_be373d7d(Insm_be373d7d) 发表:你说的这些回头我问问领导看看尝试一下,那如果之前用剩下的流动相,当时没问题,再拿来用又出现了分裂,又会是因为什么呢
说明流动相不稳定,有变化了。
lijing320323
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