主题：【已应助】胴体清洗用水微生物指标要求

菌落总数测定方法介绍

一、菌落总数测定法法适用范围：

? ? ? ? ?可用于各类食品及原料中菌落总数的测定。也可用于与食品接触的容器、操作台和其他设备表面的卫生检测。

二、菌落总数测定方法原理和测定方法：

? ? ? ? 将营养培养基、凝胶和氯化三苯基四氮唑(TTC)显色剂等加载在试纸片，经加样、培养后，细菌菌落在测试片上显现出红色菌斑，通过计数报告结果。

操作方法：1样品处理：无菌称取样品25g(或25mL)放入含有225mL无菌生理盐水的采样瓶或均质杯内，经充分振摇(均质)做成1:10的稀释液。用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL，注入含有9mL灭菌生理盐水的试管内，用1mL灭菌吸管反复吸吹制成1:100的稀释液。以此类推，做出1:1000等稀释度的稀释液，每个稀释度更换一支灭菌吸管。2接种：一般食品选2～3个稀释度进行检测，含菌量少的液体样品(如食用纯水和矿泉水等)可直接用原液检测。将测试片放在水平台面上，揭开上面的透明薄膜，用灭菌吸管吸取样品原液或稀释液1mL，均匀加到中央的纸片上，轻轻将上盖膜放下，静置5 min使培养基凝固，最后用手轻轻地压一下。每个稀释度接种两片。3培 养： 将测试片叠在一起放回原自封袋中，透明面朝上水平置于恒温培养箱内，堆叠片数不超过12片。培养温度为36℃±1℃，培养15～24h。

三、测定 结果判断与计数：

细菌在纸片上生长后会显示红色斑点，选择菌落数适中(10个～100个)的纸片进行计数，乘以稀释倍数后即为每克(或毫升)样品中所含的细菌菌落总数。菌落数在100以内时，按实有数报告。大于100时，用二位有效数字，二位有效数字后面的数字，以四舍五入方法计算，并以10的指数来表示。

通常选择菌落在10个～100个之间的纸片进行计数，乘以稀释倍数报告之(见下表中例次1)。国家标准菌落总数报告方式术语为cfu/g或mL，cfu的含义为菌落形成单位。若有两个稀释度的菌落数在10个～100个之内，两者的比值小于2，则取其平均数，若大于2，则采用稀释度小者报告(见下表中例次2和例次3)。若三个稀释度的菌落数都有在10个～100个之内时，应选择二个低数值的平均数(见下表中例次4)。若三个稀释度的菌落数均小于10个或大于100个时，应重新试用更低或更高的稀释度进行菌落计数;或采用均小于数量标准的最小值，或采用均大于数量标准的最大值(见下表中例次5和例次6)。

　　大肠杆菌大肠菌群检验方法介绍

一、 大肠杆菌检验原理及适用范围：

? ? ? ? ?大肠杆菌( Escherichia coli )和大肠菌群(Coliform)都是存在于温血动物肠道和粪便的细菌，是条件性致病菌，主要造成水体污染，也可能引起食物中毒的发生。大肠杆菌大肠菌群测试片(E.coli / Coliform Count Plate)是一种预先制备好的一次性培养基产品，可以同时检测大肠杆菌和大肠菌群，含有大肠菌选择性培养基、冷水可溶性的吸水凝胶和半乳糖苷酶(GAL)和葡萄糖醛酸酶(GUD)指示剂。大肠杆菌显蓝色，其他大肠菌群显红色，蓝点加上红点为总的大肠菌群数。本产品适合于食品及原料中大肠菌群的计数，如消毒牛乳、冷饮和调味品等样品的检测，也可用于表面的卫生检测。

二、快速检验操作方法

2.1 样品处理：取样品 25 mL(g)放入含有225 mL灭菌生理盐水的取样罐或均质杯内，制成1:10的样品匀液，用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL，注入含有9mL灭菌生理盐水的试管内，振摇后成为1:100的稀释液。

2.2 接种：一般食品选1～2个稀释度进行检测，含菌量少的液体样品(如饮用纯水和矿泉水等)可直接吸取原液进行检测。将大肠杆菌大肠菌群测试片(BE203)置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1mL样品匀液慢慢均匀地滴加到纸片上，然后再将上层膜缓慢盖下，静置5 min使培养基凝固，最后用手轻轻地压一下，每个稀释度接种两片。

2.3 培养： 将测试片叠在一起放回原自封袋中，透明面朝上水平置于恒温培养箱内，堆叠片数不超过12片。培养温度为36℃±1℃，培养15～24h。

三、大肠杆菌群结果判定:

培养后大肠杆菌显蓝色，其他大肠菌群显红色，蓝点加上红点为总的大肠菌群数。选择有阳性菌落的最高稀释度的测试片进行计数，然后乘以稀释倍数即为样品中每毫升(克)含有大肠菌群数。?如果样品的酸碱度pH 7.0以下时，应先用灭过菌的碱性溶液(如1mol/LNaOH)调节到pH7.0-～8.0。大肠杆菌大肠菌群测试片对纯菌的检测灵敏度可达0.15 cfu/mL。一般食品对于大肠菌群的要求都比较严格，如果测试片上有成片的红点，或者中央没有红点，但边缘有很多红点，一定是已经严重超标，建议按多不可计来报告。

四、 结果判断与计数：

1细菌在纸片上生长后会显示红色斑点，选择菌落数适中(10个～100个)的纸片进行计数，乘以稀释倍数后即为每克(或毫升)样品中所含的细菌菌落总数。菌落数在100以内时，按实有数报告。大于100时，用二位有效数字，二位有效数字后面的数字，以四舍五入方法计算，并以10的指数来表示。

2计数原则与报告方式

2.1 通常选择菌落在10个～100个之间的纸片进行计数，乘以稀释倍数报告之(见下表中例次1)。国家标准菌落总数报告方式术语为cfu/g或mL，cfu的含义为菌落形成单位。

2.2 若有两个稀释度的菌落数在10个～100个之内，两者的比值小于2，则取其平均数，若大于2，则采用稀释度小者报告(见下表中例次2和例次3)。

2.3 若三个稀释度的菌落数都有在10个～100个之内时，应选择二个低数值的平均数(见下表中例次4)。

2.4 若三个稀释度的菌落数均小于10个或大于100个时，应重新试用更低或更高的稀释度进行菌落计数;或采用均小于数量标准的最小值，或采用均大于数量标准的最大值(见下表中例次5和例次6)。

例次

稀释度

两稀释

度之比

选定计数

稀释度

报告方式

（个/g或

个/mL）

10-1

10-2

10-3

1

2

3

4

5

6

158

208

265

98

8

295

76

68

82

50

5

174

5

12

50

15

1

106

—

1.8

6.1

—

—

—

10-2

10-2、10-3

10-2

10-1、10-2

10-1

10-3

7.6×103

9.4×103

8.2×103

3.0×103

8.0×10

1.1×105

五、?表面取样方法：加1mL灭菌生理盐水在测试片上，静置至少1h使培养基凝固；提起上层膜，使中央滤纸部分贴到待测物表面，用手在外侧轻压；然后将上盖膜合上，置培养箱内培养。

目前针对菌落总数检测的有效国家标准有：GB 4789.2-2016《菌落总数测定》

针对大肠菌群检测的有效国家标准有：GB/T 4789.3-2003《大肠菌群测定》
选择是国家标准非饮用水标准

HJ 347.1-2018 水质 粪大肠菌群的测定 滤膜法
HJ 347.2-2018 水质 粪大肠菌群的测定 多管发酵法
HJ 755-2015 水质 总大肠菌群和粪大肠菌群的测定 纸片快速法
HJ 1001-2018 水质 总大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定 酶底物法
HJ 1000-2018 水质 细菌总数的测定 平皿计数法
相同方法的，有标准必须用标准，水和废水那本书的不能用。没标准的前提下，才能用水和废水那本书