人们最普遍地认为漂移保留时间是一个平衡问题。如果您要在未改性的硅胶柱上进行正相色谱分析，则这也是最可能出现的问题。正相色谱中的保留时间非常容易受到硅胶表面吸附水的量的影响，而硅胶表面吸附水的量又是溶解在流动相中的水的量的函数。由于水在己烷或二氯甲烷等溶剂中的溶解度极低，因此平衡色谱柱需要花费很长时间。我曾见过在非常干燥的己烷做流动相时，保留时间在平衡一周后仍在变化的情况。因此，我建议避免使用非常干燥的溶剂。解决硅胶与水的平衡问题的常用方法是使用被水“半饱和”过的溶剂。它们是通过用水饱和一定体积的疏水性溶剂，再将其与“干燥”的溶剂1:1混合制备得到。这种方法极大地缩短了平衡时间。

在反相色谱中，平衡时间很短。通常几倍体积（5至10倍）柱体积的流动相就足以达到平衡。但是，并非总是如此。一个显着的例外是在离子对色谱中用离子对试剂平衡色谱柱。离子对试剂通常的使用浓度约为2~5mmol/L或更低，它们被吸附于反相填料表面，表面浓度在0.5至2μmol/m2之间。一根规格为4.6mm x 250mm的色谱柱约含3g填料，每1g填料的表面积约为330m2。这就意味着这根色谱柱的表面积约为1000 m2。在2μmol/m2的表面吸附浓度下需要将2 mmol的离子对试剂泵入色谱柱中才能达到平衡。在2mmol/L的离子对试剂浓度下，需要一升流动相。这显然是一个极端的例子，但是如果要花费数百毫升的流动相来平衡色谱柱，请不要感到惊讶。因此，将使用离子对色谱法的色谱柱冲洗为有机溶剂以进行过夜保存是不明智的，因为在此过程中，离子对试剂会被洗掉，第二天您又不得不经过漫长的再平衡程序。

这两种现象都有一个共同的因素：流动相中一种低浓度的试剂被吸附了。这是保留时间漂移的最常见原因吗？

是的。其他现象并不常见。但是这种被强烈吸附的成分也可能来自于样品。在这种情况下，它会在反复进样过程中缓慢积累，进而改变色谱柱的化学性质。一个典型的例子就是药品中赋形剂被吸附。通过观察保留时间的变化速率，可以判断污染物是来自流动相还是来自样品。

进行如下试验：1．进行多次进样，如进样4次，总运行时间为1hr。2．不进样品，只冲洗相同时间的流动相。3．重复步骤14．分别绘出保留时间a与时间b，保留时间和进样次数的关系。如果第一张图为您提供了一条平滑的曲线，那么流动相就是污染物的载体。如果第二张图产生了一条平滑的曲线，则表明样品是污染的来源。

其他可能导致保留时间漂移的原因吗？

一种可能是流动相的组成在随时间而改变。如果你没有使用当今仪器的在线混合功能，则你有可能看到流动相中的某个组分在蒸发缓慢。当您采用向流动相中充入氦气以避免泵中出现气泡时，尤其如此。因此我们应将吹扫速度保持在最低水平。

另一种常被忽视的导致保留时间漂移的原因是键合相的水解。色谱柱制造商通常会指定一个pH范围，在该范围之外，键合相将变得“不稳定”。该范围通常是pH2到8或9。但是，我们必须谨慎看待所设定的极限值。事实上并没有明确的极限值，水解也取决于其他一些因素，例如温度和有机溶剂，并且在指定的pH范围内也可能发生缓慢水解。

键合相在中等pH值（约pH3~5）和低温条件下最不易水解。等度色谱条件下的稳定性比梯度条件好。如果等度条件下也发生了水解，那么键合相通常会吸附其自身并达到局部平衡。但是，当使用了较高浓度的有机溶剂时（例如在梯度条件下或在色谱柱清洗过程中），这种局部平衡就被打断了，水解的键合相也就会从色谱柱中冲洗出。

温度的改变会造成保留时间的漂移吗？

是的，温度也是原因之一。如果您在夜间或周末以无人值守的方式运行样品，则根据实验室温度的变化，保留时间可能会有所漂移。在许多地方，夜晚或周末的环境温度会被维持在不同的设置值，以节省能源。根据经验，环境温度每变化1℃，保留时间将漂移1%~2%。与后一种现象有关的是由色谱柱中背压增加引起的保留时间漂移。柱背压增高可能预示着色谱柱受到了污染，但即使玻璃料堵塞也可能影响保留时间。用于推动流动相通过玻璃料的压力通过摩擦使流动相升温，而温度的升高则会影响保留时间。