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液相色谱（LC）
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主题：【已应助】新手求助，液相标准品出峰问题

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Ins_862f5f42
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发表于：2022/03/17 16:29:18 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
流动相是乙腈和0.1%磷酸水，
空白溶剂是50%甲醇水

对照品为6种标准品的混标:
分别跑了初始5％，10％，20％，到50％盐的梯度，倒过来的梯度也跑了，都是只有3分钟前出一个大峰和多个连在一起的小峰。

还分别跑了20%，30%，40%，50%，60%，70%，80%，90%乙腈的等度都跑了 除了等度50%的在3分钟后有出峰，其他的都在3分钟前出大峰和一些小峰。随着乙腈增加，峰是有微小的前移变化，但是都在3分钟前出峰。

文献中查到的标准品色谱条件，分别有乙腈从5%10%20%逐步梯度到50%， 跑30分钟，出峰时间都适中在10～20分钟左右。

然后昨天也另外完全按其中一个单标国家药典的方法（除了溶剂不同，药典是乙醇，我们是50%甲醇水）跑了一针，也是只有2分钟左右的空白溶剂相同的大峰。

多种方法跑的空白溶剂，出的大峰，是在2.4分钟左右出现。

看了出峰的柱效，没有超过3000的，大多在1000左右。
这是色谱柱的问题吗，还是流动相ph的影响，会影响那么大吗，怎么调都分不开，像色谱柱完全没有保留能力。怀疑过是不是样品配的有问题，从头重新配了一个单标试了一下，出峰时间面积峰型都一样，一样的两分钟出峰。
推荐答案：安平回复于2022/03/18
            目标组分如果是极性较强的组分，可以根据其化学性质。

            调节流动相pH值，或者使用离子对试剂实验。
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xiaolanzi5
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2022/3/17 19:50:46 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
具体说说用的什么色谱柱，跑的什么标品。
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安平
byron1111
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2022/3/17 22:59:17 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
        楼主详细说说具体的分析情况为好，具体分析什么物质？具体分析条件？有图么？


        样品可以先进样浓度较大的，梯度可以先选择洗脱能力较弱的。
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Ins_862f5f42
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2022/3/18 0:08:27 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 安平(byron1111) 发表:                  楼主详细说说具体的分析情况为好，具体分析什么物质？具体分析条件？有图么？                  样品可以先进样浓度较大的，梯度可以先选择洗脱能力较弱的。
是C18柱子，跑过0.2mg/ml浓度的，也跑过20ug/ml的，单标混标都跑过，梯度从磷酸盐5%梯度到50%，都是只有2分钟左右的峰，物质是极性小分子物质，中药相关的。
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2022/3/18 0:09:04 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 xiaolanzi5(xiaolanzi5) 发表:具体说说用的什么色谱柱，跑的什么标品。
是C18柱子，跑过0.2mg/ml浓度的，也跑过20ug/ml的，单标混标都跑过，梯度从磷酸盐5%梯度到50%，都是只有2分钟左右的峰，物质是极性小分子物质，中药相关的。
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2022/3/18 0:12:53 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
只用过这个柱子，之前一直以为是梯度设置问题，然后设置了各种等度梯度，都是只有2分钟左右3分钟前的峰。还没来得及换柱子试试。
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Ins_862f5f42
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2022/3/18 0:38:11 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 Ins_862f5f42(Ins_862f5f42) 发表:是C18柱子，跑过0.2mg/ml浓度的，也跑过20ug/ml的，单标混标都跑过，梯度从磷酸盐5%梯度到50%，都是只有2分钟左右的峰，物质是极性小分子物质，中药相关的。
说错了，是5%乙腈到50%梯度
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2022/3/18 0:38:44 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
色谱条件大概如图，除了是0.1磷酸盐。
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Ins_862f5f42
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2022/3/18 0:39:11 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
色谱条件如图
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2022/3/18 0:40:46 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
图好像看不清，色谱柱:HC- C18柱;流动相:A相为乙腈溶液，B相为质量分数0.1%的磷酸溶液，采用梯度洗脱30min,乙腈与磷酸溶液体积比从5:95至50:50;波长:330 nm;流速: 1 mL/min; 柱温: 30 °C;进样量:10μL。
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拉菲
v3029822
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2022/3/18 6:03:04 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
进来学习了！
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