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主题：【求助】求助!!! 紧急请教一个关于摩尔消光系数的问题!

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dahu2000

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发表于：2007/04/14 17:42:00 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

小弟刚做酶活测试实验,方法如下:

锰过氧化物酶(MnP) 活力测定[12 ,13 ] : 先将0.1mmol MnSO4 溶解于1 L 酒石酸缓冲液( 50mmol·L - 1 ,pH = 4.5) 中,再取0.8 mL 的该溶液和012mL 粗酶液混匀,即得1 mL 反应液. 在30 ℃下,往此反应液中加20μL H2O2 溶液(20 mmol·L - 1 ) 启动酶促反应,并在290 nm 波长下测定反应2 min 前后的反应液吸光度变化. 一个酶活力单位(U) 定义为每分钟氧化Mn2 + 产生1μmol Mn3 + 所需的酶量.

但是在计算时需要知道摩尔消光系数,小弟查了很多资料都差不到,请问该方法中，290nm处的摩尔消光系数是多少???

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2007/7/19 18:37:00 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

3.15.1 仪器校正：测定重铬酸钾溶液的摩尔消光系数，以求出使用仪器的校正因素：精密称取25mg经干燥的重铬酸钾（基准级）。用0.009mol／L硫酸溶解后准确稀释至200mL（相当于0.0004mol／L的溶液）。再吸取25mL此稀释液于50mL容量瓶中，加0.009mol／L硫酸稀释至刻度（相当于 0.0002mol／L溶液）。再吸取25mL此稀释液于50mL容量瓶中，加0.009mol／L硫酸稀释至刻度（相当于0.0001mol／L溶液）。用1cm石英杯，在最大吸收峰的波长处（接近350nm）用0.009mol／L硫酸作空白，测得以上三种不同浓度的摩尔溶液的吸光度。并按下式计算出以上三种浓度的摩尔消光系数的平均值。

E1＝A／m………………………………………………………………（1）

式中：E1─—
重铬酸钾溶液的摩尔消光系数；

A──
测得重铬酸钾溶液的吸光度；

m──
重铬酸钾溶液的摩尔浓度。

　　再以此平均值与重铬酸钾的摩尔消光系数值3160比较，按下式求出使用仪器的校正因素。

f＝3160／M………………………………………………………………（2）

式中：f──
使用仪器的校正因素；

M──
测得重铬酸钾摩尔消光系数平均值。

　　若f大于0.95或小于1.05，则使用仪器的校正因素可略而不计。

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