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液相色谱（LC）

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主题：【已应助】怎么分离杂质跟目标物质

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古代的月亮

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发表于：2022/06/22 18:48:00 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

我的流动相A 甲醇+B 1%乙酸水。图一（上为标准品，图下为加标）等度洗脱，A:B=1:1。图2（上为样品，下为加标）等度洗脱，比例是A:B=80:20，这时候分的不是分好，但是能看出来分开了，所以试了A:B=90:10,A:B=70:10,效果都不好。图3（上为加标，下为标准品）梯度洗脱，0-2min,A 50%;2-3min,A 90%;3-7min,A 90%;7.1-10min,A 50%。最终分离的效果都不好，想问下大神的建议。顺便问下调整流动相的规律是什么，在一个未知物面前，怎么调整流动相比例，快速找到目标峰，然后如何将目标峰与杂质分开呀，感觉很多时候等度不太行，改变流动相比例，目标峰是变了，但是杂质峰跟着一起变。很多文献说梯度洗脱可以去除杂质，但是我不太会，望大神给予经验，谢谢。

推荐答案：hujiangtao回复于2022/06/22

分离效果不好的时候梯度洗脱程序变化速率缓慢一些

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wuyuzegang

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2022/6/22 19:57:40 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

秘诀1：由强到弱：一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或缓冲溶液)进行试验，这样可以很快地得到分离结果，然后根据出峰情况调整有机溶剂(乙腈或甲醇)的比例。
秘诀2 三倍规则：每减少10%的有机溶剂(甲醇或乙腈)的量，保留因子约增加3倍，此为三倍规则。这是一个聪明而又省力的办法。调整的过程中，注意观察各个峰的分离情况。
秘诀3 粗调转微调：当分离达到一定程度，应将有机溶剂10%的改变量调整为5%，并据此规则逐渐降低调整率，直至各组分的分离情况不再改变。
先100%的有机溶剂，在降下来。因为有些分离96%即可分离

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xiaolanzi5

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2022/6/22 20:06:17 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

感觉您这个在梯度下应该能分开。建议a相在初始比例为10%或5%，缓慢升高a相比例，到20分钟时a相为95，保持6分钟后，降到5%，整个过程30分钟。先看看能不能分开，如果能分开再缩短一针时间。另外前处理过个spe柱看看，加强一下净化。

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hujiangtao

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2022/6/22 20:30:57 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

分离效果不好的时候梯度洗脱程序变化速率缓慢一些

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古代的月亮

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新手级：新兵

2022/6/23 8:30:00 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 wuyuzegang(dahua1981) 发表:
秘诀1：由强到弱：一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或缓冲溶液)进行试验，这样可以很快地得到分离结果，然后根据出峰情况调整有机溶剂(乙腈或甲醇)的比例。
秘诀2 三倍规则：每减少10%的有机溶剂(甲醇或乙腈)的量，保留因子约增加3倍，此为三倍规则。这是一个聪明而又省力的办法。调整的过程中，注意观察各个峰的分离情况。
秘诀3 粗调转微调：当分离达到一定程度，应将有机溶剂10%的改变量调整为5%，并据此规则逐渐降低调整率，直至各组分的分离情况不再改变。
先100%的有机溶剂，在降下来。因为有些分离96%即可分离

好的，受教

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古代的月亮

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新手级：新兵

2022/6/23 8:31:43 地板管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 hujiangtao(hujiangtao) 发表:
分离效果不好的时候梯度洗脱程序变化速率缓慢一些

好的，开始就是想早点分离出来，目标峰10分钟足够出来了，就想10分钟能不能把杂质分开

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检测老菜鸟

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2022/6/23 8:35:51 6楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

）梯度洗脱，0-2min,A 50%;2-3min,A 90%;3-7min,A 90%;7.1-10min,A 50%。
你这个思路是错的。2分钟的梯度是不行的。一般试方法，像出峰这么近的，可以再低一些有机相，比如20，30之类的。然后最好是1min10%浓度梯度或者更低到你的目标梯度。

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bslwg

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2022/6/23 8:44:42 7楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

进来，学习学习

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古代的月亮

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2022/6/23 9:34:08 8楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 检测老菜鸟(v3295053) 发表:
）梯度洗脱，0-2min,A 50%;2-3min,A 90%;3-7min,A 90%;7.1-10min,A 50%。
你这个思路是错的。2分钟的梯度是不行的。一般试方法，像出峰这么近的，可以再低一些有机相，比如20，30之类的。然后最好是1min10%浓度梯度或者更低到你的目标梯度。

好的，我试了0-3min,A 20%,8min,A50%,10min,A50%,12.1min,A90%,15min,A90%,15.1min,A20%,18min,A20%。这样跑完还是不行，你有啥好的建议吗

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