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(1)PCR检测试剂被污染,模板提取环境或操作过程有污染。
(2)引物二聚体的出现。用SG法在35cycles以后阴性出现翘尾属正常情况,可配合熔解曲线进行分析。
(3)反应过程中探针的降解。用PAGE电泳对探针进行检测。
(4)如果使用了ROX校正,则可能是ROX的降解所造成。