主题：【第十五届原创】菠菜中阿维菌素液相色谱法探讨

菠菜中阿维菌素液相色谱法探讨

    关键词：菠菜 阿维菌素 液相色谱法

    GB23200.19—2016《食品安全国家标准 水果和蔬菜中阿维菌素残留量的测定 液相色谱法》，前处理复杂，分析时间长，且该方法在实际检测过程中出现一些问题，如回收率低、检出限低、精密度差等问题，本文分析了造成这些问题的原因，并提出了有效解决办法。

    （一）前处理条件优化

    称取试样20g丙酮提取，浓缩后残渣太多；布氏漏斗抽滤，每个样品需要清洗布氏漏斗，增加清洗工作量且易样品交叉污染；蔬菜、水果含水量比较高，40 ℃水浴旋转蒸发至约2 mL，浓缩到后面基本都是水。

    1.样品称样量及提取溶剂、提取方法的选择

    采取了称取试样20.0 g和10.0g，分别选择了乙腈、乙酸乙酯和丙酮三种提取溶剂。回收率与称样量没有直接关系，三种提取溶剂回收率分别为 56.9%、89.2%、93.8%，因此可选择称取试样10.0g，丙酮作为提取剂。

    参考有关阿维菌素的提取方法相关文献报道，分别采用了离心、高速匀浆、超声三种提取方式。根据实验结果最后选择选择了超声提取 30 min后，于 4500r/min 条件下离心 5 min,待净化。

    浓缩方法参考相关资料，分别比较了旋转蒸发和氮吹。根据实验结果，两种浓缩方法回收率分别为79.4%、95.7%，氮吹回收率相对较高。

    2.净化过程中没有具体说明如何完全将浓缩提取液转入SPE C18柱。如果不润洗，回收率很低。本方法采取了用6mL丙酮/乙腈分3次润洗转入SPE C18柱，再用5ml的水淋洗，去掉淋洗液。最后用5 mL甲醇洗脱，收集洗脱液，用氮气吹至近干。

图：阿维菌素标准曲线

    检出限指用某一方法可定性检测到样品中残留物的最小浓度,该水平信噪比一般为3 ,阿维菌素检出限为 0.002 ng/μL ,灵敏度高。

    定量限指可以对基质中目标残留物进行准确定量测定的最低水平,在该水平下得到的回收率和精密度应满足分析的要求,添加标准溶液质量浓度得到的信噪比一般为10,本试验添加回收率条件下,显示阿维菌素峰形及重现性较好且无杂质干扰,阿维菌素在菠菜中的定量限为 0.005 mg/kg,低于阿维菌素在菠菜中的最大残留限量。

    阿维菌素在菠菜中的平均回收率为 93.8%~97.2%,相对标准偏差为 5.5%~8.0%,添加浓度包含定量限,最大残留限量值,添加浓度能覆盖本残留试验中所有样品最高残留量,且不同添加浓度均符合回收率要求,用回收率试验的相对标准偏差衡量检测方法的精密度,不同添加浓度对相对标准偏差均符合要求。

    上述试验结果见表。

    （一）色谱柱。当色谱柱污染后，峰面积会随着测定次数的增加而增加，影响测定结果的RSD值。实验过程中要确保色谱柱的干净程度，特别在进行比对时，要用干净的色谱柱。

    （二）基质效应。同一种农药在不同蔬菜中有不同程度的基质效应，为了准确定量，理论上每种基质都需要制作对应的基质匹配标准曲线。为减少工作方法的工作量，在不影响结果准确性的前提下，选择一种有代表性的基质作为通用基质。

    （三）为保证数据准确，在操作过程中还要注意以下几方面：

    1.准确移取4mL上清液前，用该液润洗三次移液管，保证吸取刻度准确。

    2.氮吹时气流大了容易把液体吹出造成损失，气流太小氮吹时间延长，都会影响回收率。氮吹近干要求小烧杯内壁有潮潮的一层，吹干后回收率小。氮吹过程中要用干净滤纸擦去针头上的水珠，防止水珠落入瓶中氮吹不准确，影响结果。

    3.SPE C18柱使用前用 5 mL 甲醇和 5 mL 水活化，净化时小柱不能干，当溶剂液面到达柱吸附层表面时，立即倒入净化溶液。小柱干了不容易洗脱，影响回收率。

    四、结论

    本方法称取试样10 g，采用超声提取，净化浓缩处理后,采用高效液相色谱法测定阿维菌素的检出限为 0.002 ng/μL,定量限为 0.005mg/kg。样品添加质量浓度0.005、0.01、0.1 mg/kg,每个浓度重复 6 次,添加回收率为 92.5%~96.7%,相对标准偏差小于7.2%。此方法实验步骤操作简单，灵敏度高，经添加回收率实验表明得出的回收率、重复性均满足农药残留分析的要求，适用于水果、蔬菜中阿维菌素的批量检测。