主题：【已应助】求助液相检测段肽的方法

一般考虑C18色谱柱就可以了，流动相可以选用水（0.1%TFA），乙腈（0.1%TFA）。

可以参考实战宝典的解答
（1）在开始做多肽分析之前首先要了解多肽的构成，以及氨基酸的性质。20种氨基酸中两个酸性（Asp、Glu），三个碱性（Arg、His、Lys），以及他们的亲疏水性质（可查阅二十种氨基酸的疏水值），特别是Val、Ile、Leu三者基团多的肽链要格外注意。
（2）其次，需要选择合适的溶剂（如甲醇、乙腈或水）溶解待测样品。对于一条肽链来说，能否顺利检测，关键是有没有合适的溶剂能够将其溶解。
a.可以称取少量样品（10~100mg）于2mL透明进样瓶中，选择不同体积、不同种类的溶剂进行溶解，控制加入溶剂的体积。如果加完有机溶剂后再加入水的过程中出现样品的析出，可以适当增加有机溶剂的体积。
b.肽链的酸碱性会影响样品的溶解性，通常碱性肽链容易溶解，酸性肽链溶解性较差，此时可以尝试用醋酸铵或者10%的氨水进行溶解。如果肽链中含有Cys基团，则尽量少用碱性助溶试剂，可以尝试先用纯甲酸溶解再用乙腈和水稀释至适当体积；如果必须用到碱性助溶试剂，则需要现用现配，避免样品变质。
c.如果乙腈与水不能溶解，而且该肽不显酸碱性，则考虑加甲酸进行溶解，然后加乙腈和水稀释，溶解时溶剂的加入顺序非常重要。
d.体积控制好后观察样品中有没有不溶的颗粒物或者絮状物，可以选择超声促进样品的溶解，否则用滤膜过滤掉不溶物。
（3）检测时需要注意，含Trp的样品检测前加少许酸，如TFA、乙酸等，含量为0.1%~ 1%，再用吹风机对吹2~5min，瓶身发烫为止，否则Trp会结合不稳定的羧基，影响测定结果。含两个连续的Pro或以上，多个连续Ser的多肽物质测定时，需将柱温箱加热到50℃。如果整条肽链均由两三个基团重复构成，在C18色谱柱上出峰的可能性较小，此时可以考虑用氰基柱；对于那些用碱性溶剂溶解的样品，尽量用氰基柱，流动相采用4g/L的醋酸铵缓冲溶液。
（4）选择梯度洗脱时，需要注意，以 C18色谱柱（4.6mm?250mm、5μm）的为例，流动相：A为水（0.1%TFA），B为80%乙腈（0.1%TFA），以下涉及流动相比例均为体积比。
a.十个氨基酸左右长度的肽，亲疏水总和接近0时就用10%~70%B；如果亲水的总值是疏水总值的两倍，酌情考虑用0%~60%B或者5%~65%B；如果亲水的总值是疏水总值的1/2，考虑用20%~80%B。
b.如果氨基酸链长达到二十多个，前面三种情况就要分别改为梯度20%~80%、10%~70%、30%~90%；但也要注意对亲疏水性影响很大的几种氨基酸的比例，亲水的总值越大，流动相B比例越低。