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主题：【第十五届原创】如何用液质联用对未知物进行定性分析？

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通标小菜鸟
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菜鸟分析队发表于：2022/10/08 19:42:08 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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如何用液质联用对未知物进行定性分析？

通标小菜鸟



1、 准备工作

1、 核对样品名称、编号。

2、 询问样品提供人，了解样品来源、合成路线、光谱及波谱数据，理化性质（熔点、沸点、溶解性等），查阅相关文献。

3、 了解可能含有的杂质，样品大致含量，样品保存状态、温敏、光敏等。

4、 大致摸一下LC条件，确定流动相以及缓冲体系，确保符合MS要求。

5、 色谱柱的准备，冲洗干净并且进行活化处理。

6、 样品溶剂不合适需要进行置换，与流动相保持一致，固体样品可加入一滴DMSO后再加甲醇或者乙腈进行稀释。

2、 色谱柱选择

1、 选择长柱来提高分离度， 不同内径推荐流速4.6mm（流速1.0ml/min）、3mm（流速500μL/min）、2.1mm（流速200μL/min）、1mm（流速50μL/min）。

2、 特殊的化合物不知道如何选择色谱柱，可以直接询问厂家，看是否有专用柱进行分离。

3、 LC条件的优化

1、 设置梯度淋洗，可以确保快速分离，同时也能获得更好的峰型，缩短分析时间，提高实验效率。

2、 分析多肽类化合物一般采用梯度洗脱，采用梯度洗脱获得的信号要比等度洗脱来的强。

4、 确定离子化方式

1、 根据样品性质来确定离子化方式

ESI源（电喷雾电离源）：适用于离子型和极性化合物，特别是热不稳定极性化合物、小分子药物、各种体液代谢产物、农药、化工产品中间体杂质鉴定，大分子蛋白质和肽类的分子量，氨基酸测序等。但不适合苯等极端非极性化合物。

APCI源（大气压化学电离源）：适用于弱极性、中等极性小分子，如脂肪酸、邻苯二甲酸、脲等物质，不适合非挥发性、热稳定性差的物质。

2、 正模式和负模式的选择

正模式：适用于碱性化合物，如含有鞭氨酸、精氨酸和组氨酸的肽类，可用乙酸（pH为3~4）或甲酸（pH为2~3）对样品加以酸化。

负模式：适用于酸性化合物，如含有谷氨酸、天冬氨酸的肽类可用氨水或三乙胺进行碱化。

如果遇到未知性质的化合物，可用正负离子模式都做，然后选择灵敏度高的方式进行分析。

5、 初步定性-确定化合物的分子量

1、 纯样品可以使用针泵直接进样，设置低的DP值，通过改变DP值观察离子增减，M+1、M+18、M+23、M+39、2M+1等等，初步判断分子量。

2、 采集一段时间溶解样品的溶剂本底信息，DP同实际样品相同，以便扣除本底干扰，可使用高、低DP电压各做一次，如20V/80V等。

3、 当样品溶液含有强离子抑制物质时，直接进样可能看不到化合物分子离子峰（离子抑制），此时可以经色谱柱分离或者对样品用溶剂进行稀释。
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Insm_f1be3617
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2022/10/31 19:34:15 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
不管是已知物质的分析也好，还是未知物分析也好，其实做的多了，都会总结出那么一些套路，之后的工作按照套路走就会游刃有余很多
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通标小菜鸟
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2022/11/3 18:29:16 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 Insm_f1be3617(Insm_f1be3617) 发表:不管是已知物质的分析也好，还是未知物分析也好，其实做的多了，都会总结出那么一些套路，之后的工作按照套路走就会游刃有余很多
是这样的，不管做什么做的多了积累了经验就会有自己的见解和窍门
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memory光阴
Ins_91d3b22d
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2022/11/3 20:22:26 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
感谢老师分享，了解了如何对未知物进行分析
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通标小菜鸟
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2022/11/5 22:24:47 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 memory光阴(Ins_91d3b22d) 发表:感谢老师分享，了解了如何对未知物进行分析
感谢回复和评论
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马克西姆
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2022/11/7 9:57:45 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
请教：纯样品为什么要设置低DP进样啊？
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马克西姆
v2795912
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2022/11/7 10:00:33 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 马克西姆(v2795912) 发表:
请教：纯样品为什么要设置低DP进样啊？
哦，去簇电压，也就是多数质谱上的锥孔电压。
主要是影响离子进入质谱的速度。锥孔电压高，离子速度快，离子损失小，检测灵敏度高。反之则相反。过高的锥孔电压会增加离子间的碰撞，引起源内裂解，产生碎片离子。通常再25－70V之间优化。低分子量选用低电压，高分子量选用高电压。
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ie4680180
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2022/11/25 15:36:42 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
很实用，如果大师能举个例子来说明就更好了。
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通标小菜鸟
v3141805
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2022/11/25 15:46:22 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 ie4680180(ie4680180) 发表:很实用，如果大师能举个例子来说明就更好了。
等有合适的案例，整理好了发上来
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feirenlei911
feirenlei911
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2023/3/14 16:58:19 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
保留时间，碎片离子，离子之间的丰度比定性
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