前言

近日，一篇关于《长江流域抗生素污染调查》的报道，长江流域抗生素浓度偏高，水生态系统受到破坏，相关调查显示，长三角约40%孕妇尿液中检出抗生素，近80%儿童尿液中检出兽用抗生素，部分检出抗生素已在临床中禁用，有可能严重损害人体免疫力。因此抗生素类药物的检测与监控越发重要。

对于水中抗生素类药物检测，固相萃取技术越来越多地得到应用，本文使用全自动固相萃取系统进行水源水中四环素类、头孢类和磺胺类的萃取净化，并用高效液相色谱进行检测，通过全自动固相萃取系统建立的方法加标回收率良好，适合水源水中抗生素类药物的检测。

关键词

头孢类；四环素；磺胺类；抗生素

1、水中四环素类抗生素的检测方法

1仪器设备及试剂

1.1仪器设备

SPE1000全自动固相萃取系统；

M64 高通道平行浓缩仪；

LC600 二元高压梯度高效液相色谱；

固相萃取柱HLB 500 mg/6 ml 。

1.2试剂

甲醇、乙腈（色谱纯 FISHER Chemical）；

草酸、盐酸（分析纯）；

Mcllvaine 缓冲溶液：将1000ml 0.1mol/L 的柠檬酸溶液与625mL 0.2mol/L 磷酸氢二钠混合；

0.1mol/L Na2EDTA-Mcllvaine 缓冲溶液：称取60.5g 乙二胺四乙酸二钠放于1625mL Mcllvaine 缓冲溶液中，溶解，摇匀；

土霉素、四环素、金霉素标准物质：纯度>=95%；

土霉素、四环素、金霉素混合标准储备溶液：准确称取提土霉素、四环素、金霉素各 10mg，用甲醇定容至100ml 容量瓶中（100mg/L，甲醇）；

2实验过程

2.1样品预处理

采集每500mL 水源水作为一个样品，装入SPE1000样品瓶中，加入250mgEDTA-Na₂，20%盐酸调节PH约为2 。

2.2 SPE富集及浓缩

按照图1所示方法进行样品的SPE净化。

洗脱液收集到收集瓶中，用M64 40℃ 5psi浓缩后，用流动相定容至1mL，涡旋混匀，待检测。

图1土霉素、四环素、金霉素固相萃取方法

2.3高效液相色谱检测条件

色谱柱：C18，柱长250mm，内径4.6mm，粒径5μm，或性能相当者；

流动相：乙腈：甲醇：0.01mol/L草酸溶液=2:1:7；

流速：0.5mL/min；

紫外检测波长：214nm；

柱温：30℃；

进样量：20μL。

3实验结果

3.1土霉素、四环素、金霉素混标液相色谱图

图2为三种混标液相色谱图。

图2 5mg/L土霉素、四环素和金霉素液相色谱图

3.2空白样品液相色谱图

图3为空白样品液相色谱图。

图3 空白样品液相色谱图

3.3加标回收率

图4为加标样品液相色谱图，加标回收率结果如表1所示。

图4 加标样品液相色谱图

表1 加标回收率结果

序号	化合物	添加水平（mg/L）												平均值%	RSD%
		1	2		3		4		5		6
1	土霉素	85.5		74.4		78.5		83.7		80.6		72.6	79.3		6.4
2	四环素	81.0		89.2		83.1		86.5		88.3		80.3	84.7		4.5
3	金霉素	78.3		86.9		88.1		83.7		76		84.1	82.9		5.8