主题：【第十五届原创】CA 对细胞状态的影响

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小小矮马

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小矮马发表于：2022/11/16 22:10:04 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

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CA对A549细胞状态的影响

首先探究了 CA 对细胞生长状态的影响。以 A549 细胞为例，设置了终浓度为

0、300 μM 的 CA 浓度梯度，并观察其在不同时间（3、9、18 h）的细胞状态。如图 3-

1 所示，加入 CA 后细胞的状态发生了显著的变化，在 3 h 时就已经出现细胞形态的改变；当 18 h 时，细胞已经有死亡的迹象。

图 CA 刺激 A549 细胞，终浓度为 0 μM、300 μM，不同时间细胞状态图

CA对 A549细胞活力的影响

本文设置了终浓度为 0、50、100、300、500、1000、1500、2000、3000 μM 的 CA 浓度梯度，细胞在 5% CO₂、37 ℃的培养箱中无血清培养6 h，最终得出了浓度依赖型的曲线。如图 3-2 所示，加入 600 μM 的 CA 对细胞的抑制率可达到 50%左右；当 CA 加入浓度为 2.5 mM 时，细胞的存活率只有 20%；当 CA 的加入浓度为 3 mM 时，细胞已经死亡。

图不同浓度梯度（0、50、100、300、500、1000、1500、2000、3000 μM）CA 刺激 A549

细胞测的细胞活力曲线图

)

蛋白免疫印迹分析

以 A549 为例，本文选用不同浓度（0、20、50、100、300、500 μM）的 CA 处理1 h 后的细胞裂解液与生物素孵育，进一步进行免疫印迹分析。如图所示， Westerningblotting 分析表明，随着 CA 浓度增加，曝光后的条带逐渐加深，这进一步证明了 CA 已成功结合到蛋白上，从而在蛋白上引入可被酰肼生物素标记的醛基，同时也可进一步证明酰肼化学法能够实现CA 靶蛋白的标记。

图一定浓度梯度（0、20、50、100、300、500 μM）CA 刺激 A549 细胞的免疫印迹结果和

考马斯染色结果

CA修饰肽段分析

选用 50、100、300μM的 CA处理 A549、K562细胞，每个样品各做三次生物学重复并进行分析。如图 3-4所示，在浓度 50μM的 CA刺激下，可从 A549细胞鉴定到 16个高可信度的 CA修饰位点，从 K562细胞鉴定到了

32 个高可信度的 CA 修饰位点；在 100 μM 的 CA 刺激下，可从 A549 细胞中鉴定到 43 个高可信度的 CA 修饰位点，从 K562 细胞中鉴定到了 100 个高可信度的 CA 修饰位点；在 300 μM 的 CA 刺激下，可从 A549 细胞中鉴定到 264 个高可信度的 CA 修饰位点，从 K562 细胞中鉴定到了 355 个高可信度的 CA 修饰位点。