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主题：【第十六届原创】ODC1在DLBCL中的表达及ODC1低表达细胞模型的构建

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小矮马发表于：2023/10/08 23:08:42 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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ODC1在DLBCL中的表达及ODC1低表达细胞模型的构建

ODC1 低表达细胞模型的构建

应用慢病毒感染技术敲低DLBCL细胞系Pfeiffer ODC1的表达，同时设置对照组除外病毒本身对细胞产生的影响，待细胞状态良好使用嘌呤霉素筛选；荧光显微镜下观察如图，可见Pfeiffer-shNC、Pfeiffer-shODC1-1、Pfeiffer-shODC1-2细胞均产生绿色荧光，表明人DLBCL细胞系慢病毒感染成功。

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图  慢病毒感染后 4X 荧光显微镜下图片（Pfeiffer明场及荧光照片）



敲低 ODC1 后转录水平和蛋白水平验证

分别提取对数生长期的Pfeiffer-NC、Pfeiffer-shODC1-1、Pfeiffer-shODC1-2细胞的RNA和蛋白，利用q-PCR 技术分别检测各细胞ODC1 mRNA 相对表达量，结果如图所示，与对照组相比，Pfeiffer-shODC1-1、Pfeiffer-shODC1-2组ODC1 mRNA 表达量明显降低（P <0.001）。利用Western blot技术检测各细胞内 ODC1 蛋白的表达情况。结果如图所示，与对照组相比，ODC1蛋白表达在Pfeiffer-shODC1-1、Pfeiffer-shODC1-2细胞中明显降低。表明ODC1低表达细胞模型构建成功。

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图  敲低 ODC1 在转录水平和蛋白水平的验证（***P <0.001）



小结

1. 公共数据库分析显示ODC1在DLBCL中的表达高于正常组织，与DLBCL的分期无明显关系，高表达ODC1的DLBCL的DFS明显降低；实时荧光定量PCR（q-PCR）及Western blot结果显示ODC1在人DLBCL细胞系中的表达均显著增加。

2. 应用shODC1慢病毒载体感染Pfeiffer细胞后，利用q-PCR及Western blot实验验证ODC1在mRNA及蛋白水平的表达，结果显示，与对照组相比，Pfeiffer-shODC1组ODC1的mRNA及蛋白的表达明显降低。表明ODC1低表达细胞模型构建成功，可以用于后续实验。
附件：
2-4ODC1在DLBCL中的表达及ODC1低表达细胞模型的构建 .docx(未验证)
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