主题：【第十六届原创】食品维生素E（α-TE）检测分析

食品维生素E（α-TE）检测分析

概述：
食品按照GB 5009.82-2016《食品安全国家标准 食品中维生素 A、D、E的测定》第一法 食品中维生素A和维生素E的测定 反相高效液相色谱法检测维生素E含量。GB 29923-2013要求成品应检测维生素E（α-TE）含量。GB 14880-2012要求维生素E与维生素E（α-TE）转换时，应带入系数进行折算。对产品维生素E与维生素E（α-TE）检验结果进行分析，GB 29922-2013的规定。

1、检验方法分析

1.1、实验过程使用Sigma生产的α-生育酚(C₂₉H₅₀O₂）标准品，CAS号为10191-41-0，标准溶液配制、样品前处理过程，均符合GB 5009.82-2016的要求。
1.2、按照GB 5009.82-2016中（6）分析结果的表述，检测结果为试样中的维生素E含量。如维生素E的测定结果要用α-生育酚当量(α-TE)表示，按照维生素E(mgα-TE/100g)=α-生育酚 (mg/100g)+β-生育酚(mg/100g)×0.5+γ-生育酚(mg/100g)×0.1+δ-生育酚(mg/100g)×0.01。润能产品中维生素E来源于食品营养强化剂dl-α-醋酸生育酚，符合GB 14756-2010的规定。产品中不含有β-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚。

2、检验方法分析
2.1、检验检测方法依据：GB 5009.82《食品安全国家标准 食品中维生素A、D、E的测定》第一法 食品中维生素A和维生素E的测定 反相高效液相色谱法。
2.2、仪器与用具：高效液相色谱仪、电子天平、紫外可见分光光度计、隔膜真空泵、溶剂过滤器、恒温振荡器、旋转蒸发器、平底烧瓶、量筒、分液漏斗、pH试纸(pH范围1～14)、滤纸、漏斗、旋转蒸发瓶、滴管、容量瓶、移液管、刻度吸管、氮吹仪、0.22μm有机系滤膜。
2.3试剂：甲醇（色谱纯）、无水乙醇、抗坏血酸、氢氧化钾溶液(50g/100g)、石油醚（30℃～60℃）、无水硫酸钠、2，6-二叔丁基对甲酚（BHT）。

3、操作方法
3.1、色谱柱：C₁₈柱(柱长250mm，内径4.6mm，粒径5μm)，或相当者；柱温：30℃；流动相：甲醇；流速：0.8mL/min；紫外检测波长：维生素A为325nm；维生素E为294nm。
3.2、标准溶液配制：维生素A标准储备溶液(0.500mg/mL)：准确称取25.0mg维生素A标准品，用无水乙醇溶解后，转移入50mL容量瓶中，定容至刻度，此溶液浓度约为0.500mg/mL（或同等配制成浓度为0.500mg/mL的维生素A标准储备溶液）。将溶液转移至棕色试剂瓶中，密封后，在-20℃下避光保存，有效期1个月。临用前将溶液回温至20℃，并进行浓度校正。
3.3、标准溶液配制：维生素E标准储备溶液(1.00mg/mL)：准确称取α-生育酚50.0mg，用无水乙醇溶解后，转移入50mL容量瓶中，定容至刻度，此溶液浓度约为1.00mg/mL（或同等配制成浓度为1.00mg/mL的维生素E标准储备溶液）。将溶液转移至棕色试剂瓶中，密封后，在-20℃下避光保存，有效期6个月。临用前将溶液回温至20℃，并进行浓度校正。
3.4、维生素A和维生素E混合标准溶液中间液：准确吸取维生素A标准储备溶液1.00mL和维生素E标准储备溶液5.00mL于同一50mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，此溶液中维生素A浓度为10.0μg/mL，维生素E浓度为100μg/mL。
3.5、维生素A和维生素E标准系列工作溶液：分别准确吸取维生素A和维生素E混合标准溶液中间液0.20mL、0.50mL、1.00mL、2.00mL、4.00mL、6.00mL于10mL棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度，该标准系列中维生素A浓度为0.20μg/mL、0.50μg/mL、1.00μg/mL、2.00μg/mL、4.00μg/mL、6.00μg/mL，维生素E浓度为2.00μg/mL、5.00μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL、40.0μg/mL、60.0μg/mL。临用前配制。
3.6、试样制备：称取50g（精确至0.01g）试样于150mL平底烧瓶中，再加入1.0g抗坏血酸和0.1gBHT，混匀，加入30mL无水乙醇，加入10mL～20mL氢氧化钾溶液，边加边振摇，混匀后于80℃恒温水浴震荡皂化40min，皂化后立即用冷水冷却至室温。（注：皂化时间一般为30min，如皂化液冷却后，液面有浮油，需要加入适量氢氧化钾溶液，并适当延长皂化时间）将皂化液用30mL水转入250mL的分液漏斗中，加入50mL石油醚（30～60℃），振荡萃取5min，将下层溶液转移至另一250mL的分液漏斗中，加入50mL的石油醚（30～60℃）再次萃取，合并醚层。用约100mL水洗涤醚层，约需重复3次，直至将醚层洗至中性(可用pH试纸检测下层溶液pH值)，去除下层水相。将洗涤后的醚层经无水硫酸钠(约3g)滤入250mL旋转蒸发瓶中，用约15mL石油醚冲洗分液漏斗及无水硫酸钠2次，并入蒸发瓶内，并将其接在旋转蒸发器上，于40℃水浴中减压蒸馏，待瓶中醚液剩下约2mL时，取下蒸发瓶，立即用氮气吹至近干。用甲醇分次将蒸发瓶中残留物溶解并转移至50mL容量瓶中，定容至刻度。溶液过0.22μm有机系滤膜后供高效液相色谱测定。
3.7、将试样溶液20μL注入高效液相色谱仪进行分析，测得峰面积，采用外标法计算其浓度。

4、结果分析
按照方案维生素E含量进行检验，结果如表1：



对检验结果进行分析，三批次产品平行12个点（时间段）考察，维生素E含量没有降解趋势，结果符合GB 29922-2013的规定。

维生素E和维生素E（α-TE）转换按照GB 14880-2012问答（十六、关于营养强化剂的使用量，例2维生素E：本标准规定维生素E的使用量是以“d-α-生育酚”计，相应的换算系数如下：1mg dl-α-生育酚=0.74 mg d-α-生育酚），即维生素E转换为维生素E（α-TE）需要乘以系数0.74，对3批次工艺验证样品维生素E（α-TE）含量进行计算，结果如表2：



将维生素E含量乘以系数0.74，转换为维生素E（α-TE），计算结果仍然符合GB 29922-2013的规定。

原则上GB 14880-2012要求维生素E与维生素E（α-TE）转换时，应带入系数进行折算。所以大家在检验时候需要注意，标准中维生素E与维生素E（α-TE）绝对不是一回事。